Naslov
Usporedba dviju metoda izolacije genomske DNA iz tumora središnjeg živčanog sustava čovjeka
(The comparison of two methods of DNA isolation from human tumors of the central nervous system)

Autori
Perić, Jelena

Izvornik
Prirodoslovno-matematički fakultet Sveučilišta u Zagrebu

Vrsta, podvrsta
Ostale vrste radova, rektorova nagrada

Godina
2005

Ključne riječi
izolacija genomske DNA; tumori središnjeg živčanog sustava
(genomic DNA isolation; central nervous system tumors)

Sažetak
Tehnike molekularne biologije omogućuju utvrđivanje nasljednih abnormalnosti i neoplazmatskog rasta stanica. Prvi korak u takvim testovima obično je izolacija DNA visoke molekularne težine iz krvi, koštane srži, tkiva ili kultiviranih jednojezgrenih stanica. Najčešće se koriste neautomatizirane metode, metoda izolacije DNA fenolom i kloroformom, te metoda izolacije DNA isoljavanjem proteina. Iako se izolacija fenolom i kloroformom uglavnom smatra najboljom metodom izolacije DNA, danas se traže zamjene te metode, kojima se izbjegavaju karcinogeni, fenol i kloroform. Kako bih pokazala da je metoda isoljavanjem proteina prihvatljivija, iz 30 sam tumora središnjeg živčanog sustava čovjeka izolirala DNA metodom fenola i klorofoma i metodom isoljavanja proteina, te usporedila uspješnost tih dviju izolacija spektrofotometrijskim mjerenjima koncentracije i čistoće dobivenih uzoraka DNA. Pokazala sam da u 53 % slučajeva metoda fenola i kloroforma daje veću koncentraciju DNA po miligramu korištenog tumorskog tkiva, međutim, kod metode isoljavanjem proteina, ukupna je koncentracija DNA u 500 μ l TE pufera dovoljna za kvalitetan PCR. Metoda izolacije DNA isoljavanjem proteina, s druge strane, u većini uzoraka daje čišću DNA nego metoda fenola i kloroforma. S obzirom na takve podatke, i na činjenicu da metoda izolacije DNA fenolom i klororformom predstavlja za čovjeka i za okoliš veću opasnost, puno dulje traje, napornija je, troši više kemikalija i najvjerojatnije degradira DNA u većoj mjeri, došla sam do zaključka da je izoliranje DNA metodom isoljavanja proteina prihvatljivije od metode fenola i kloroforma.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Temeljne medicinske znanosti

Napomena
Voditeljica : doc. dr. sc. Nives Pećina-Šlaus Suvoditeljica : dr. sc. Inga Marijanović

POVEZANOST RADA