Naslov
Inhibicija tirozil-tRNA-sintetaze iz Saccharomyces cerevisiae modificiranom tRNATyr
(Inhybition of tyrosyl-tRNA synthetase from Saccharomyces cerevisiae by modified tRNATyr)

Autori
Gruić-Sovulj, Ita

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, magistarski rad

Fakultet
Prirodoslovno-matematički

Mjesto
Zagreb

Datum
03.07

Godina
1998

Stranica
69

Mentor
Kucan, Zeljko

Ključne riječi
oksidirana tRNATyr; izmjena pirofosfata/MALDI-MS; tirozil-tRNA-sintetaza
(modified tRNATyr; MALDI-MS; Pyrophosphate exchange; tyrosyl-tRNA synthetase)

Sažetak
Pročišćena oksidirana tRNATyr kvasca korištena je pri proučavanju utjecaja tRNATyr na reakciju izmjene pirofosfata, prvog stupnja reakcije katalizirane kvaščevom tirozil-tRNA-sintetazom. Čistoća tRNATyr provjerena je određivanjem akceptorske aktivnosti, gel elektroforezom i MALDI-TOF spektromertrijom masa. Kao osnova prilikom snimanja MALDI spektara korištena je smjesa 2,4,6-,2,3,4-trihidroksiacetofenona i diamonijevog citrata, a uzorak tRNATyr jr podvrgnut intenzivnoj ionskoj izmjeni. U navedenim eksperimentalnim uvjetima i uz primjenu linearnog TOF analizatora postignuto je razlučivanje mase m/delta m=220. Mjerenja početne brzine izmjene pirofosfata kao funkcije koncentracije tirozina i ATP, pokazala su da je modificirana tRNATyr kompetetivni inhibitor vezanja oba navedena supstrata na TyrRS. U uvjetima velokog molarnog suviška modificirane tRNATyr, kada je sav TyrRS u kompleksu s tRNATyr, izmjena pirofosfata odvija se s 50 % početne aktivnosti. To upućuje na zaključak da tRNATyr vezana na dimer enzima kompetira s vezanjem ATP i tirozina samo na jednoj podjedinici. Ako kvaščev TyrRS izmjenjuje pirofosfat uz aktivnost polovine mjesta, dobiveni rezultat može se objasniti jedino uz pretpostavku da u polovini kompleksa TyrRSxtRNATyr, vezana tRNATyr ne ometa pristup aktivnom mjestu.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA