Naslov
Izolacija protoplasta iz tkiva smreke
(The protoplast isolation from spruce tissue)

Autori
Ogrešević, Alma

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad

Fakultet
Pedagoški fakultet

Mjesto
Osijek

Datum
21.02

Godina
2000

Stranica
43

Mentor
Cesar, Vera

Ključne riječi
Picea abies; protoplast; in vitro kultura
(Picea abies; protoplast; in vitro culture)

Sažetak
Izolacija, kultura i fuzija protoplasta su jedne od najznačajnijih tehnika kulture tkiva. Protoplasti se izoloraju dvoma metodama: mehaničkom i enzimskom. Mehanička metoda je uporabljena prvi puta 1892. godine. Danas se upotrebljava samo povremeno, ali svakako ima povijesni značaj. Enzimska metoda ima više prednosti mehaničkom a to su: izoliranje većih količina protoplasta, stanice se ne oštete prilikom izolacije i smanjenje osmotskog volumena stanice je manje. Protoplasti su izolirani iz mnogih biljnih organa (listova, korijena, plodova, koleoptila, kultura tkiva itd.). Enzimi koji se upotrebljavaju za razgradnju stanične stjenke su uglavnom celulaza, hemicelulaza i pektinaza. Moguće su i kombinacije ovih enzima. U ovisnosti od biljne vrste, tipa biljnog organa ovisi koncentracija enzima. Uvjeti u kojima se vrši izolacija također su različiti (pH otopine, vrijeme i temperatura inkubacije, osvijetljenost). Za izolaciju protoplasta sam koristila vegetativne pupove smreke (Picea abies). Smreka je važna gospodarska biljka a njeno drvo se koristi u industriji papira, drvne građe i smole. Izolacija protoplasta je prvi korak u kulturi biljnih tkiva i u ovisnosti o njenoj uspješnosti ovisi cijela metoda kulture biljnih tkiva i regeneracija kompletne biljke. Enzimskom metodom sam uspjela izolirati protoplaste iz vegetativnih pupova smreke i to iz njihovog meristemskog tkiva. Glavni problem mog rada je bio standardiziranje metode izolacije protoplasta na uvjete koji se mogu stvoriti u školskom laboratoriju. Ova metoda uključuje: (1.) izolaciju vegetativnih pupova, (2.) tretmane sa otopinom za ispiranje, enzimskom otopinom i otopinom za namakanje (3.) filtraciju i centrifugiranje izoliranih protoplasta. Kultura protoplasta je suvremeno područje istraživanja koje je od izuzetnog značaja za genetičko inžinjerstvo. Metode i tehnike koje se koriste se stalno usavršavaju i stoga mi je u ovom radu bio izazov pokušati primijeniti jednu od tih tehnika u skromnijim uvjetima. Na taj način sam došla do zaključka da se i suvremena problematika i istraživanja mogu približiti na zanimljiv način učenicima u školama i studentima.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA