Naslov
Izazovi u bioanalitici: osjetljiva i selektivna metoda za detekciju pirfenidona i njegovog metabolita u biološkom uzorku
(Challenges in bioanalysis: a sensitive and selective method for the detection of pirfenidone and its metabolite in a biological sample)

Autori
Turković, Lu ; Sertić, Miranda

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Sažeci sa skupova, sažetak, znanstveni

Izvornik
Simpozij studenata farmacije i medicinske biokemije / Bojić, Mirza ; Somborac Bačura, Anita - Zagreb : Farmaceutsko-biokemijski fakultet Sveučilišta u Zagrebu, 2019, 33-33

ISBN
978-953-8273-01-8

Skup
8. simpozij studenata farmacije i medicinske biokemije (FARMEBS 2019.)

Mjesto i datum
Zagreb, Hrvatska, 01.06.2019

Vrsta sudjelovanja
Poster

Vrsta recenzije
Domaća recenzija

Ključne riječi
bioanaliza ; HPLC-MS ; pirfenidon ; karboksipirfenidon
(bioanalysis ; HPLC-MS ; pirfenidone ; carboxypirfenidone)

Sažetak
Bioanalitičke metode bave se analizom tvari u složenim uzorcima poput tkiva, obično prisutnih u niskim koncentracijama. Zahtijevaju sofisticirane instrumente koji omogućuju selektivnu i osjetljivu detekciju i kvantifikaciju analita u prisustvu različitih interferirajućih komponenata poput proteina, lipida i soli. Također je važna odgovarajuća priprema uzoraka kako bi se smetajuće molekule iz matriksa uklonile u što većoj mjeri. Cilj ovog rada bila je istodobna, selektivna i osjetljiva detekcija pirfenidona, antifibrotskog lijeka, i njegovog 5-karboksi metabolita u srčanom tkivu lijekom tretiranih štakora. U tu svrhu uzorci su pulverizirani, vorteksirani s 50%-tnim acetonitrilom, centrifugirani te supernatanti injektirani na C18 HPLC kolonu Symmetry (Waters) dimenzija 4, 6 × 150 mm i veličine čestica 3, 5 µm. Primijenjena je izokratna eluacija mobilnom fazom sastava acetonitril : voda : mravlja kiselina = 50 : 50 : 0, 1% (V/V/V), brzine protoka 0, 4 mL/min i temperature kolone 28 °C. Detekcija je provedena pomoću spektrometra masa (eng. Mass Spectrometer, MS) uz ionizaciju elektroraspršenjem (eng. Electrospray Ionisation, ESI). Prije pristupanja analizi uzoraka, proučeni su ESI + MS spektri pirfenidona i karboksipirfenidona te analizirana njihova MS2 fragmentacija. Za detekciju karboksipirfenidona primjenjiva je i ESI- kojom nastaju deprotonirani molekulski ioni. Kromatogram potpune struje iona (eng. Total Ion Current Chromatogram, TIC) kod bioloških uzoraka nije dovoljno selektivan zbog velike količine iona različitih masa koji nastaju iz matriksa. Zato je korišten EIC (eng. Extracted Ion Current Chromatogram), odnosno kromatogram po odabranoj masi fragmenta, koji pokazuje porast intenziteta signala samo u onom vremenu kad eluira fragment odabranog omjera m/z, u ovom slučaju protonirani molekulski ioni pirfenidona (m/z 186) i karboksipirfenidona (m/z 216). U analizi uzoraka tretiranih štakora korištenjem EIC m/z 186 i m/z 216 dobiveni su jasni pikovi bez značajnog šuma matriksa pa je zadovoljen zahtjev za osjetljivošću i selektivnošću. Kao negativna kontrola poslužili su uzorci netretiranih štakora, kako bi se isključilo porijeklo pikova iz samog složenog matriksa biološkog uzorka.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija, Farmacija

POVEZANOST RADA