Naslov
Utjecaj izvanstaničnog proteina Hsp70 i cigaretnog dima na aktivaciju inflamasoma, nekroptoze i piroptoze u staničnim modelima kronične opstrukcijske plućne bolesti
(Effect of extracellular protein Hsp70 and cigarette smoke on the inflammasome, necroptosis and pyroptosis activation in cellular models of chronic obstructive pulmonary disease)

Autori
Fabijanec, Marija

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Farmaceutsko-biokemijski fakultet, Zavod za medicinsku biokemiju i hematologiju

Mjesto
Zagreb

Datum
04.09

Godina
2020

Stranica
64

Mentor
Lada Rumora

Ključne riječi
KOPB, eHsp70, ekstrakt cigaretnog dima, inflamasom, nekroptoza, piroptoza
(COPD, eHsp70, cigarette smoke extract, inflammasome, necroptosis, pyroptosis)

Sažetak
Kronična opstrukcijska plućna bolest (KOPB) složena je bolest čija patogeneza uključuje kroničnu upalu, a povezana je s dugotrajnom izloženošću štetnim česticama, posebice cigaretnom dimu. U krvi bolesnika s KOPB-om izmjerene su povišene koncentracije izvanstaničnog Hsp70 (eHsp70) koji djeluje imunomodulacijski. Cilj ovog diplomskog rada bio je ispitati potiču li ekstrakt cigaretnog dima (CSE), eHsp70 te njihove kombinacije aktivaciju NLRP3 inflamasoma te izazivaju li piroptozu i nekroptozu. Oponašanje imunomodulacijskog djelovanja eHsp70 postignuto je korištenjem rekombinantnog humanog Hsp70 proteina (rhHsp70). Provodila su se tretiranja in vitro modela KOPB-a, a to su NCI-H292, THP-1, NHBE i MDM stanice, s rhHsp70 u koncentracijama 0, 3, 1 i 3 μg/mL, 2, 5, 5 i 15 %-tnim CSE-om te njihovim kombinacijama tijekom 24 sata. Aktivacija NLRP3 inflamasoma i upalni odgovor ispitani su određivanjem ekspresije mRNA za NLRP3 i IL-1β qPCR-om te određivanjem koncentracije izlučenog IL-1β. Vijabilnost stanica ispitana je određivanjem aktivnosti laktat-dehidrogenaze (LDH) izlučene u medij iznad stanica, a njihov način umiranja ispitan je određivanjem aktivacije i ekspresije RIPK3 i MLKL-a (nekroptoza) te ekspresije GSDMD-a (piroptoza) Western blot analizom nakon tretiranja tijekom 2 i 8 h te određivanjem koncentracije IL-1β (piroptoza). Dokazano je da je ekspresija gena za NLRP3 i IL- 1β, kao i izlučivanje IL-1ß, u svim stanicama značajno povećana nakon primijenjenih pojedinačnih tretiranja, što upućuje na aktivaciju inflamasoma i upalu. Kombinirana tretiranja bila su stimulacijska u MDM stanicama, inhibicijski učinak imala su na NCI-H292 i NHBE stanice, a u THP-1 stanicama nisu imala učinak u odnosu na pojedinačna tretiranja. Litička stanična smrt dokazana je u staničnim linijama (NCI-H292 i THP- 1), ali ne i u primarnim stanicama (NHBE i MDM). Promjena u ekspresiji GSDMD-a ili aktivacija RIPK3 i MLKL-a nije dokazana u MDM stanicama. Ekspresija GSDMD-a smanjena je u NCI-H292 i THP-1 stanicama, ali nije detektiran GSDMD-NT. U NHBE stanicama detektirani su aktivirani, odnosno fosforilirani oblici RIPK3 i MLKL-a što ukazuje na nekroptozu ili alternativni put aktivacije NLRP3 inflamasoma za koji se pretpostavlja da bi mogao biti uključen u mnoga sterilna upalna stanja, primjerice kod stabilne faze KOPB-a.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Temeljne medicinske znanosti, Farmacija

POVEZANOST RADA