Naslov
Konstrukcija i validacija vektora za ekspresiju represorskog oblika proteina GLI3 u stanicama čovjeka
(Construction and validation of the expression vector for the repressor form of the GLI3 protein in human cells)

Autori
Brtan, Lucija

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
16.02

Godina
2023

Stranica
86

Mentor
Sabol, Maja

Ključne riječi
signalni put HH-GLI ; ekspresijski vektor ; GLI3 ; stanice čovjeka
(HH-GLI signaling pathway ; expression vector ; GLI3 ; human cells)

Sažetak
Proteini GLI važni su sudionici signalnog puta Hedgehog-GLI čiji se razni poremećaji u signalizaciji povezuju se s razvojnim deformacijama te onkološkim oboljenjima. U fokusu ovog rada nalazi se protein GLI3, jedan od tri izoforme proteina GLI. Protein GLI3 u svom punom obliku (GLI3FL) ima ulogu transkripcijskog aktivatora, dok njegov C-terminalni skraćeni oblik ima ulogu represora (GLI3R). Cilj ovog istraživanja je razvitak in vitro alata za ispitivanje različitih funkcija GLI3FL i GLI3R u tumorskim stanicama. Konstruiran je vektor za ekspresiju GLI3R, a njegova validacija izvršena je na staničnim linijama s različitom proteinskom ekspresijom proteina GLI3. Uvjeti transfekcije su optimizirani na staničnoj liniji fibroblasta prostate WPMY-1 s niskom razinom ekspresije, a efekt transfekcije ispitan je na staničnoj liniji metastatskog melanoma A375 s visokom razinom ekspresije, te uspoređen s djelovanjem spojeva koji mijenjaju omjere GLI3FL/GLI3R. Nakon transfekcije staničnih linija, analizom po Westernu dokazana je povećana ekspresija proteina GLI3R, a RT-qPCR metodom je potvrđena povećana ekspresija gena GLI3. Imunofluorescencijskom metodom proteini GLI3 su lokalizirani u citoplazmi te u jezgri stanica.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija, Biologija, Temeljne medicinske znanosti

POVEZANOST RADA