Naslov
Automatizacija predobrade uzoraka – završni korak u rutinskoj primjeni određivanja vitamina D referentnom metodom (LC-MS/MS)
(Automation of sample preparation - final step in application of reference method (LC-MS/MS) for vitamin D determination into routine workflow)

Autori
Radeljak, Andrea ; Ivić, Matea ; Perkov, Sonja, Kardum Paro, Mirjana Mariana

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Sažeci sa skupova, sažetak, stručni

Izvornik
Biochemia medica 2022 ; 32(Suppl.1):S1-S232. / - : Hrvatsko društvo za medicinsku biokemiju i laboratorijsku medicinu (HDMBLM), 2022, S164-S165

Skup
10. kongres Hrvatskog društva za medicinsku biokemiju i laboratorijsku medicinu

Mjesto i datum
Zagreb, Hrvatska, 28.09.2022. - 01.10.2022

Vrsta sudjelovanja
Poster

Vrsta recenzije
Međunarodna recenzija

Ključne riječi
automatizacija predobrade uzoraka, određivanje vitamina D, LC-MS/MS
(automation of sample preparation, vitamin D determination, LC-MS/MS)

Sažetak
Uvod: Tekućinska kromatografija visoke učinkovitosti spregnuta s dvojnom spektrometrijom masa (LCMS/MS) je referentna metoda za određivanje koncentracije vitamina D čiju primjenu u rutinskom radu priječe visoka cijena potrebne opreme, kompleksnost analize i zahtjevna predobrada uzoraka. Kako bismo smanjili opeterećenje osoblja i odgovorili na progresivno povećanje broja zahtjeva za određivanje koncentracije vitamina D tijekom pandemije bolesti COVID-19 pokrenuli smo automatizaciju predanalitičkih postupaka. Cilj ovog rada bio je verifikacija protokola za automatiziranu predobradu uzoraka pri određivanju koncentracije vitamina D u serumu LCMS/MS metodom te usporedba rezultata pacijenata dobivenih manualnom i automatiziranom pripremom. Materijali i metode: Za verifikaciju preciznosti pri automatiziranoj predobradi uzoraka (CLAM2030, Shimadzu) prema smjernicama CLSI EP15-A3 korišteni su komercijalni kontrolni uzorci (RECIPE ClinChek) i reagens (RECIPE ClinMass® LC-MS/MS 25- OH Vitamin D2/D3 Complete Kit), a za procjenu sustavne pogreške (BIAS) uzorci (N = 4) neovisnog organizatora VKKR Referenzinstitut für Bioanalytik. Usporedivost rezultata određivanja koncentracije vitamina D metodom LC-MS/MS (UPLC NEXERA X2-LCMS-8050, Shimadzu) nakon manualne i automatizirane predobrade uzoraka (N = 48) procijenjena je regresijskom analizom Passing Bablok. Rezultati: Statističkom obradom rezultata (MedCalc v19.0.6) dobiveni su rezultati (u dvije koncentracijske razine) za ponovljivost (5, 6% i 5, 3%), međupreciznost (3, 4% i 3, 8%) i ukupnu laboratorijsku preciznost (5, 7% i 5, 8%). Procjenjena je veličina sustavne pogreške kao prosječno odstupanje 3, 9% od medijana skupine. Usporedba rezultata određivanja koncentracije vitamina D metodom LC-MS/MS pokazala je korelaciju između koncentracija dobivenih automatiziranom pripremom u odnosu na manualnu pripremu prema jednadžbi y = - 1, 2046 (- 4, 4904 do 2, 3555) + 1, 1128(1, 0471 do 1, 1696)x, uz prosječnu razliku od +8, 9%. Zaključak: Verifikacijom preciznosti dobiveni su rezultati koji zadovoljavaju postavljene kriterije za LC-MS/MS metode prema CLSI C62-A (CV ≤ 15%). Analizom VKKR uzoraka postignute su vrijednosti unutar dozvoljenih odstupanja (≤ 30%). Usporedbom različitih metoda pripreme uzoraka dobivene razlike zadovoljavaju poželjne kriterije sukladno biološkoj varijabilnosti (CVi = 6, 8% (4, 7% do 12, 8%)), što omogućava brzo uvođenje utomatizirane predobrade uzoraka u rutinski rad i potpunu automatizaciju procesa potrebnih za određivanje koncentracije vitamina D metodom LC-MS/MS.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kliničke medicinske znanosti

POVEZANOST RADA