Naslov
Korištenje CRISPR/Cas9 metode za inaktivaciju puta DNA popravka izrezivanjem nukleotida (engl. Nucleotide Excision Repair) u zebrici (Danio Rerio)
(Use of CRISPR/Cas9 method for inactivation of DNA repair with Nucleotide Excision Repair in zebrafish (Danio rerio))

Autori
Mance, Lucija

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, preddiplomski

Fakultet
Prehrambeno-biotehnološki fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
10.07

Godina
2020

Stranica
35

Mentor
Stuparević, Igor

Ključne riječi
CRISPR/Cas9, DPC, NER, xpa, zebrica
(CRISPR/Cas9, DPC, NER, xpa, zebrafish)

Sažetak
Cilj ovog rada bio je konstruirati RNA vodilju (engl. single guide RNA, sgRNA) za CRISPR/Cas9 inaktivaciju xpa gena u ribi zebrici (lat. Danio rerio), sa svrhom inaktivacije puta DNA popravka izrezivanjem nukleotida (engl. Nucleotide Excision Repair, NER), kako bi se utvrdila uloga NER puta popravka u DPC popravku (engl. DNA-protein crosslink repair, DPC repair) in vivo u modelnom organizmu. Dizajniran je DNA kalup za sintezu sgRNA za xpa in silico te in vitro sljepljivanjem DNA proba. Kalup je umnožen lančanom reakcijom polimeraze (engl. Polymerase Chain Reaction, PCR) te vizualiziran DNA elektroforezom u agaroznom gelu. PCR amplikon služio je kao kalup za sintezu sgRNA in vitro transkripcijom. Kao provjera in vitro transkripcije provedena je RNA elektroforeza u agaroznom gelu. Sintetizirana sgRNA visoke je kvalitete i koncentracije. Uspješnost djelovanja sgRNA dalje se provjerava konstrukcijom Cas9/sgRNA kompleksa, mikroinjektiranjem embrija zebrice i praćenjem uvedenih promjena genotipizacijom pomoću HRMA metode (engl. High Resolution Melting Analysis).

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biotehnologija

POVEZANOST RADA