Naslov
Utjecaj vrste epruvete za vađenje krvi i metode izolacije na prinos egzosoma iz plazme
(Influence of the type of blood collection tube and isolation method on the yield of exosomes from plasma)

Autori
Jurič, Magdalena ; Ljubica, Josip ; Somborac Bačura, Anita

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Sažeci sa skupova, sažetak, znanstveni

Izvornik
FARMEBS 2022 Knjiga sažetaka / Šakić, Davor ; Pavić, Kristina - Zagreb, 2022, 40-40

ISBN
978-953-8273-14-8

Skup
10. simpozij studenata farmacije i medicinske biokemije (FARMEBS 2022)

Mjesto i datum
Zagreb, Hrvatska, 22.10.2022

Vrsta sudjelovanja
Poster

Vrsta recenzije
Domaća recenzija

Ključne riječi
egzosomi, izolacija, plazma, predanalitika
(exosomes, isolation, plasma, preanalytics)

Sažetak
Egzosomi su izvanstanične vezikule promjera 30–150 nm, bogate proteinima, RNA i DNA molekulama. Njihov sadržaj specifičan je za tkivo od kojega potječu zbog čega su prikladni za molekularno profiliranje tumora. Cilj ovog istraživanja bio je ispitati prinos egzosoma ovisno o vrsti epruvete za vađenje krvi i metodi izolacije egzosoma iz plazme. Plazma je dobivena centrifugiranjem pune krvi izvađene u K2EDTA (Greiner Bio-One, Austrija) i CellSave Preservative Tubes (Menarini Silicon Biosystems, SAD) epruvete. Izolacija je provedena korištenjem dva komercijalna kompleta – miRCURY Exosome Serum / Plasma Kit (Qiagen, Njemačka) iz 600 μL plazme i Invitrogen Total Exosome Isolation Kit (from plasma) (ThermoFisher Scientific, SAD) iz 1200 μL plazme. Veličina i brojčana koncentracija egzosoma izmjereni su metodom dinamičkog raspršenja svjetlosti na uređaju Zetasizer Ultra (Malvern Pananalytical, UK). Western blot metoda korištena je za konačno dokazivanje prisutnosti egzosoma u izolatu korištenjem mišjih monoklonskih protutijela na egzosomski biljeg CD9 te ispitivanje prikladnosti uzorka egzosoma za daljnje analize dokazivanjem odsutnosti kalneksina (biljega endoplazmatskog retikula). Izmjerena koncentracija i veličina egzosoma nisu se značajno razlikovale ovisno o korištenoj epruveti te su obje prikladne za izolaciju egzosoma. Izmjerena veličina egzosoma bila je u očekivanom nanometarskom rasponu. Primijećena je značajna razlika u veličini egzosoma ovisno o korištenom kompletu za izolaciju te su tako ThermoFisherovom metodom izolacije dobiveni veći egzosomi nego Qiagenovom metodom. Iako se početni volumeni plazme za izolaciju razlikuju, Qiagenovom metodom se iz upola manjeg početnog volumena dobiva gotovo 100 puta veća koncentracija egzosoma nego ThermoFisherovom metodom. Daljnjim analizama Western blotom u nereducirajućim uvjetima dokazana je prisutnost CD9 u uzorcima egzosoma izoliranima Qiagenovim kompletom. Izostankom karakteristične vrpce za kalneksin dokazana je odsutnost endoplazmatskog retikula i prikladnost uzoraka egzosoma za daljnje analize proteina i RNA molekula. Sveukupni rezultati veličine i koncentracije egzosoma te vizualnim očitanjem količine proteina na gelu za SDS-PAGE razvidno je da Qiagenov komplet daje bolji prinos egzosoma od ThermoFisherovog kompleta te da izbor vrste epruvete (K2EDTA ili CellSave Preservative Tubes) ne utječe na rezultat.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Farmacija

POVEZANOST RADA