Pregled bibliografske jedinice broj: 1221033
Optimizacija izolacije zigotnih embrija uročnjaka (Arabidopsis thaliana (L.) Heynh.) u svrhu istraživanja kvantitativne ekspresije gena
Optimizacija izolacije zigotnih embrija uročnjaka (Arabidopsis thaliana (L.) Heynh.) u svrhu istraživanja kvantitativne ekspresije gena, 2021., diplomski rad, diplomski, Zagreb, Hrvatska
CROSBI ID: 1221033 Za ispravke kontaktirajte CROSBI podršku putem web obrasca
Naslov
Optimizacija izolacije zigotnih embrija uročnjaka
(Arabidopsis thaliana (L.) Heynh.) u svrhu
istraživanja kvantitativne ekspresije gena
(Optimization of Arabidopsis thaliana (L.) Heynh.
zygotic embryo isolation for subsequent use in
quantitative gene expression analysis)
Autori
Demir, Tanita
Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski
Mjesto
Zagreb, Hrvatska
Datum
26.02
Godina
2021
Stranica
53
Mentor
Bauer, Nataša
Neposredni voditelj
Škiljaica, Andreja
Ključne riječi
Arabidopsis thaliana, izolacija embrija, mikromanipulacija, izolacija mRNA, qPCR
(Arabidopsis thaliana, embryo isolation, micromanipulation, mRNA isolation, qPCR)
Sažetak
Analize genske ekspresije u pojedinim embrionalnim stadijima daju uvid u genetske mehanizme i regulatorne mreže koji omogućuju potpuni razvoj embrija. Zbog točno određenog i predvidljivog razvoja tijekom embriogeneze, uročnjak (Arabidopsis thaliana (L.) Heynh.) je idealan model u takvim istraživanjima. Brojne tehničke poteškoće povezane s izolacijom različitih stadija zigotnih embrija otežavaju analize ekspresije gena tijekom embriogeneze. Ovim radom uhodane su lako primjenjive metode izolacije pojedinih stadija embrija uročnjaka koje omogućuju izdvajanje velikog broja čistih embrija, oslobođenih od stanica majčinske biljke koje u ovakvom tipu istraživanja predstavljaju kontaminaciju. Uhodan je postupak mikromanipulacije zigotnih embrija, upotrebom invertnog mikroskopa s mikrodisektorom, koji omogućuje izdvajanje nekoliko razvojnih stadija embrija. Na različitim transgeničnim i mutantnim linijama uročnjaka provedena je metoda izolacije dovoljne količine mRNA za analize ekspresije gena u kotiledonarnim embrijima. Metodom reverzne transkripcije mRNA su prepisane u cDNA koja je korištena kao kalup za umnažanje u kvantitativnoj lančanoj reakciji polimeraze (qPCR), te je analizirana relativna ekspresija gena CML41 i FBW2 u kotiledonarnim embrijima. Provedeno istraživanje ukazuje da je za analizu genske ekspresije do 6 gena metodom qPCR potrebno izolirati ukupnu mRNA iz 70-tak kotiledonarnih embrija. Metode izolacije embrija i mRNA provedene u ovom radu pomoći će u planiranju eksperimenata transkriptomske analize embrija u budućim istraživanjima.
Izvorni jezik
Hrvatski
Znanstvena područja
Biologija
POVEZANOST RADA
Projekti:
HRZZ-IP-2016-06-6229 - MATH-BTB proteini kao regulatori transkripcije i RNA posredovane metilacije DNA u biljnom razvitku (PHYTOMETHDEV) (Leljak-Levanić, Dunja, HRZZ - 2016-06) ( CroRIS)
Ustanove:
Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb
