Naslov
Ispitivanje gubitka heterozigotnosti i mutacija tumorskog supresorskog gena DPC4 (Smad4) u sporadičnim karcinomima debelog crijeva
(Loss of heterozygosity and mutations of tumor suppressor gene DPC4 (Smad4) in sporadic colon carcinoma)

Autori
Popović Hadžija, Marijana

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Sažeci sa skupova, sažetak, znanstveni

Skup
III. Hrvatski kongres humane genetike s međunarodnom suradnjom

Mjesto i datum
Zagreb, Hrvatska, 03.09.2003. - 04.09.2003

Vrsta sudjelovanja
Predavanje

Vrsta recenzije
Domaća recenzija

Ključne riječi
DPC4; LOH

Sažetak
Cilj rada: Genetske promjene u karcinomima debelog crijeva odnose se uglavnom na aktivaciju specifičnih onkogena ili inaktivaciju tumor supresorskih gena gubitkom heterozigotnosti (engl. LOH , Loss of Heterozygosity) i/ili mutacijom. U karcinomima debelog crijeva gubitak jednog dijela kromosoma česta je pojava vezana poglavito za kromosome 20, 13, 18 i 4. Tumor supresorski gen DPC4 nalazi se na lokusu 18q21.1, a otkriven je genetskom analizom karcinoma gušterače. Cilj ovog rada bio je utvrditi učestalost gubitka heterozigotnosti gena DPC4 u 60 uzoraka sporadičnog karcinoma debelog crijeva, te istražiti najčešće mutacije ovog gena poglavito u eksonima 8 (kodon 358), 10 (kodon 412) i 11 (kodon 493), kao i prisutnost mutacija u ostalim eksonima gena. Metode: Genomska DNA tumora i odgovarajućeg normalnog tkiva (krv) korištena je kao kalup u lančanoj reakciji polimerazom (engl. PCR, Polymerase Chain Reaction) za umnažanje tri polimorfna biljega (D18S474, D18S363, D18S46). U 10% ne-denaturirajućem gelu poliakrilamida analiziran je gubitak heterozigotnosti pomoću ponavljajućih slijedova nukleotida DNA (engl. VNTR, Variable Nucleotide Tandem Repeats analysis) na sva tri korištena biljega. Za ispitivanje mutacija u eksonima 8, 1 0 i 11 korištena je analiza cijepanja restrikcijskim enzimima Mnl 1, Mae 1 i Bsp HI (engl. RFLP , Restriction Fragment Length Polymorphism), a produkti cijepanja analizirani su na Spreadex gelovima EL 400 (Elchrom Scientific, Switzerland). Postojanje mutacija u svih 11 eksona gena ispitivano je SSCP (engl. single strand conformation polymorphism) metodom. Rezultati: Od ukupno 60 analiziranih uzoraka 58 (97%) bilo je informativno (heterozigotno). Gubitak heterozigotnosti gena DPC4 zabilježen je u 37 (64%) informativnih uzoraka. Niti u jednom analiziranom uzorku nije pronađena mutacija u eksonima 8, 10 i 11. U tumoru T35 nađena je nova, do sada neobjavljena, mutacija (delecija 20 parova baza) u eksonu 11 koja je potvrđena sekvencioniranjem (Microsynth GmbH, Switzerland). Zaključak: Opisani rezultati idu u prilog višestrukim genetskim promjenama u malignoj progresiji karcinoma debelog crijeva, a inaktivacija gena DPC4 zasigurno pridonosi tom procesu.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Temeljne medicinske znanosti

POVEZANOST RADA