Naslov
Ciljana mutageneza ljudskog elongacijskog faktora-2 i konstrukcija staničnih linija otpornih na difterijski toksin
(Site-specific mutagenesis of human elongation factor-2 (EF-2) and construction of diphtheria toxin resistant cell lines)

Autori
Ivanković, Milena

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, magistarski rad

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
14.04

Godina
2003

Stranica
66

Mentor
Brdar, Branko

Ključne riječi
elongacijski faktor-2 (EF-2); difterijski toksin (DT); ciljana mutageneza; stanične linije rezistentne na DT.
(elongation factor-2 (EF-2); diphtheria toxin (DT); site-specific mutagenesis; DT resistant cell lines.)

Sažetak
Eukariotski elongacijski faktor-2 (EF-2) sudjeluje u translaciji proteina. U procesu elongacije peptidnog lanca katalizira GTP ovisnu translokaciju peptidil-tRNA s aminokiselinskog na peptidilno mjesto ribosoma. EF-2 sadrži jedinstven postranslacijski modificiran histidinski ostatak, diftamid 2-(karboksiamido-trimetilamonio-propil)-histidin. Diftamid se u aminokiselinskom slijedu normalnog ljudskog EF-2 nalazi na poziciji 715. Kod eukariota, difterijski toksin (DT) ADP-ribozilira diftamid i tako inaktivira EF-2, zaustavlja sintezu proteina i izaziva smrt stanice. Zamjenom His715 s jednom od četiri druge aminokiseline: leucinom (L), metioninom (M), asparaginom (N) ili glutaminom (Q) konstruirali smo četiri različita oblika ljudskog EF-2 rezistentnog na DT, metodom ciljane mutageneze. Mutirane oblike EF-2 klonirali smo u ekspresijski vektor pCMVexSVneo, unijeli ga u HeLa CD4 stanice transfekcijom i izolirali rezistentne stanične klonove HeLa CD4/EF-2 (L, M, N i Q) selekcijom u difterijskom toksinu. Ove bi stanice mogle poslužiti za uzgoj modificiranih viriona HIV-a koji kodiraju A fragment difterijskog toksina (DT-A).

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA