Naslov
Određivanje uspješnosti genskog ciljanja u kvascu Kluyveromyces marxianus
(Determination of gene targeting fidelity in yeast Kluyveromyces marxianus)

Autori
Karla Johman

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prehrambeno-biotehnološki fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
29.09

Godina
2020

Stranica
44

Mentor
Ivan-Krešimir Svetec

Neposredni voditelj
Anamarija Štafa

Ključne riječi
Kluyveromyces marxianus ; gensko ciljanje ; transformacija ; homologna rekombinacija
(Kluyveromyces marxianus ; gene targeting ; transformation ; homologous recombination)

Sažetak
Kvasac Kluyveromyces marxianus termotolerantni je kvasac zanimljivih fizioloških svojstva zbog čega je interesantan i kao radni mikroorganizam za brojne biotehnološke procese. U ovome radu, određena je uspješnost genskog ciljanja u konstruiranom soju kvasca K. marxianus. U prvom koraku ovaj kvasac transformiran je linearnim fragmentom NatBAV koji sadrži selektivni biljeg coNat odgovoran za rezistenciju na antibiotik nurserotricin, a čija je integracija u genom potvrđena hibridizacijom po Southern-u. U drugom koraku soj koji je u genomu sadržavao fragment NatBAV, transformiran je linearnim fragmentom HygBAV koji sadrži gen coHyg odgovoran za rezistenciju na antibiotik higromicin, a s obje strane selektivnog biljega nalazile su se regije homologne fragmentu NatBAV. Kao rezultat uspješnog genskog ciljanja dolazi do zamjene genomske regije sekvencom na transformirajućoj DNA procesom homologne rekombinacije. Nakon selekcije na podlozi s antibiotikom higromicinom, dobiveni transformanti replicirani su na podlogu s nurserotricinom te je u 70 % transformanata utvrđena zamjena gena coNat genom coHyg. Ova uspješnost je postignuta s relativno dugim bočnim homologijama (1, 4 i 2, 5 kb), a na temelju rezultata je ustanovljeno da je gensko ciljanje u kvascu K. marxianus znatno uspješnije nego u većini drugih vrsta nekonvencionalnih kvasaca.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biotehnologija

POVEZANOST RADA