Naslov
Stanična imunost i citotksični potencijal u bolesnika s višestrukim ozljedama tijela
(CELLULAR IMMUNITY AND CYTOTOXIC POTENTIAL IN MULTIPLE INJURED PATIENTS)

Autori
Gržalja, Nikola

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, doktorska disertacija

Mjesto
Rijeka

Datum
29.03

Godina
2018

Stranica
132

Mentor
Cicvarić, Tedi ; Sotošek, Vlatka

Ključne riječi
Bolesnik s višestrukim ozljedama tijela ; perforin ; stanice NK ; stanice NKT ; stanična imunost
(Cellular Immunity ; Multiple Injured Patient ; NK Cells ; NKT Cells ; Perforin)

Sažetak
Cilj istraživanja: Višestruke ozljeda tijela povezane su s povećanim rizikom od nastanka komplikacija, što može biti povezano s intenzivnim proupalnim i protuupalnim odgovorom organizma na ozljedu. Iako su brojni radovi objasnili utjecaj višestrukih ozljeda na funkciju imunološkoga sustava, postoji vrlo malo podataka o promjenama u citolitičkom potencijalu imunokompetentnih stanica, uključujući i izražavanje citolitičkih posrednika kao što je perforin. Cilj ovog rada bio je istražiti i usporediti promjene u udjelu leukocitnih subpopulacija, kao i promjene u njihovom izražavanju perforina u perifernoj venskoj krvi bolesnika s izoliranom ozljedom donjih ekstremiteta, bolesnika s izoliranom ozljedom grudnog koša te bolesnika s ozljedom grudnog koša i pridruženom ozljedom donjih ekstremiteta. Ispitanici, materijal i metode: U istraživanje je bilo uključeno 90 bolesnika (30 bolesnika s izoliranom ozljedom donjih ekstremiteta, 30 bolesnika s izoliranom ozljedom grudnog koša te 30 bolesnika s ozljedom grudnog koša i pridruženom ozljedom donjih ekstremiteta), a kontrolnu skupinu činilo je 30 zdravih dobrovoljnih davaoca krvi koji su spolom i dobi odgovarali skupinama bolesnika. Uzorci periferne venske krvi bolesnika uključenih u ispitivanje uzimani su odmah po dolasku u bolnicu te su potom postupkom centrifugiranja na gradijentu gustoće izolirane mononuklearne stanice. Izolirane mononuklearne stanice su obilježene s monoklonskim protutijelima na površinske biljege kako bi se utvrdila njihova pripadnost pojedinom leukocitnim populacijama (limocitima T, stanicama NK, stanicama NKT) i njihovim subpopulacijama. Dodatno je izoliranim mononuklearnim stanicama permeabilizirana membrana te metodom izravne imunofluorescencije unutarstanično obilježena citotoksična molekula perforin i citokin interleukin (IL)-15. Uzorci koji su bili predviđeni za unutarstanično obilježavanje IL-15 prethodno su stimulirani s PMA (eng. phorbol myristate acetat), jonomicinom i monenzinom radi prikazivanja citokina u stanici. Stanice obilježene protutijelima su analizirane na protočnome citometru. Koncentracije interleukina-4 (IL-4) i interferona-gama (IFNγ) u plazmi bolesnika određene su upotrebom ELISA (od eng. enzyme linked immunosobrent assay) komercijalnih kitova. Metodom pozitivne magnetske separacije iz mononuklearnih stanica periferne krvi izdvojene su stanice NK i određivana njihova citotoksična aktivnost prema K-562 NK- osjetljivoj staničnoj liniji korištenjem PKH-26 dvosatnog testa citotoksičnosti uz očitavanje protočnim citometrom. Rezultati: U bolesnika s ozljedom grudnih organa i pridruženom ozljedom donjih ekstremiteta postoji statistički značajan pad udjela limfocita T, stanica NK, stanica NKT i njihovih subpopulacija te značajan pad u izražaju perforina u perifernoj venskoj krvi u odnosu na kontrolnu skupinu i skupine bolesnika s izoliranom ozljedom donjih ekstremiteta i izoliranom ozljedom grudnog koša. U skupini bolesnika s ozljedom grudnog koša i pridruženom ozljedom donjih ekstremiteta utvrđene su povećane koncentracije IL-4 i IFNγ neposredno po ozljedi. Bolesnici s istovremenom ozljedom donjih ekstremiteta i grudnoga koša imaju statistički značajno manju citotoksičnost prema NK-osjetljivoj staničnoj liniji K-562 u odnosu na ostale skupine bolesnika. U skupini višestruko ozlijeđenih bolesnika s ozljedom grudnog koša i pridruženom ozljedom donjih ekstremiteta postoji značajna negativna korelacija između težine ozljede, određene ISS skorom (eng. Injury Severity Score) i postotka limfocita T, stanica NK i postotka stanica NKT. U skupini višestruko ozlijeđenih bolesnika s ozljedom grudnog koša i pridruženom ozljedom donjih ekstremiteta postoji značajna negativna korelacija između težine ozljede određene ISS- om te postotka perforin pozitivnih stanica NK i postotka perforin pozitivnih stanica NKT. Zaključak: Iz dobivenih rezultata može se zaključiti da je pad u udjelu limfocita periferne venske krvi, kao i smanjenje njihovog citotoksičnog potencijala povezan s težinom ozljede, što može pridonijeti povećanoj pojavi komplikacija koje se javljaju u skupini višestruko ozlijeđenih bolesnika.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kliničke medicinske znanosti

POVEZANOST RADA