Naslov
Izazovi bioanalitike tiopurina i endogenog folata u eritrocitima, plazmi i urinu - razvoj HPLC-DAD-FLD metode za terapijsko praćenje lijekova
(Challenges of bioanalysis of thiopurines and endogenous folate in red blood cells, plasma and urine - development of HPLC-DAD-FLD method for therapeutic drug monitoring)

Autori
Džajić, Ivan

Izvornik
Sveučilište u Zagrebu, Farmaceutsko-biokemijski fakultet

Vrsta, podvrsta
Ostale vrste radova, rektorova nagrada

Godina
2020

Ključne riječi
bioanalitika ; terapijsko praćenje lijekova ; tekućinska kromatografija visoke djelotvornosti ; 5-metiltetrahidrofolat ; azatioprin
(bioanalysis ; therapeutic drug monitoring ; high performance liquid chromatography ; 5- methyltetrahydrofolate ; azathioprine)

Sažetak
Bioanalitika i terapijsko praćenje lijekova područja su izrazito prožeta problematikom koja se stalnim napretkom znanosti rješava, bilo da se radi o zdravstvenom, analitičkom ili financijskom aspektu. Cilj ovog istraživanja bio je postavljanje temelja analitičkoj HPLC metodi koja bi kvantificirala 5-MTHF u plazmi, odnosno tiopurine u eritrocitima i urinu, istovremeno obraćajući pozornost na što jednostavniju praktičnu primjenjivost i vjerodostojnost njezinih rezultata. Kao uzorci plazme za analizu 5-MTHF korišteni su uzorci zdravog dobrovoljca, a kao uzorci eritrocita korišteni su uzorci zdravog dobrovoljca obogaćeni tiopurinskim metabolitima u očekivanim koncentracijama. Kao uzorak urina upotrijebljen je umjetni urin obogaćen tiopurinskim metabolitima. Razvijena je HPLC- DAD-FLD metoda vremena trajanja 18 minuta. Od većeg broja ispitanih ekstrakcijskih tehnika, kao optimalna metoda pripreme uzorka plazme pokazala se predobradba ekstrakcijom na čvrstoj fazi, uz perklornu kiselinu kao taložni reagens. Nakon optimizacije količine antioksidansa ditiotreitola i vremena zagrijavanja uzoraka na 100 °C u blok-grijaču, eritrociti su obrađeni pri optimalnim uvjetima te analizirani HPLC metodom. Uzorak urina uključivao je jednostavan korak taloženja proteina pomoću perklorne kiseline te razrjeđenja. Važan zahtjev selektivnosti za ovu metodu je zadovoljen. Ispitani su validacijski parametri linearnosti, točnosti i ponovljivosti za metodu analize tiopurinskih metabolita u eritrocitima. Pri ispitivanju linearnosti, koeficijent korelacije je u svih analita iznosio preko 0, 989, a donja granica kvantifikacije metode bila je reda veličine 10- 100 ng/mL. Kod ispitivanja točnosti analitički prinosi analita iznosili su između 90, 29 % i 114, 6 %. Ponovljivost metode nije prelazila vrijednost relativne standardne devijacije od 14, 81 %, osim u slučaju 6-MP. Unatoč zahtjevnosti predobradbe i analize bioloških uzoraka, razvijena je kratkotrajna, selektivna i ponovljiva bioanalitička metoda sa zadovoljavajućim prinosom kod svih očekivanih analita.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija, Farmacija

Napomena
Studentski rad izrađen je pod mentorstvom prof.
dr. sc. Ane Mornar Turk i neposrednim mentorstvom
Edvina Brusača, mag. pharm., te nagrađen
Rektorovom nagradom u ak.god. 2019./2020.

POVEZANOST RADA