Naslov
Ciljana inaktivacija gena GFP u E. coli metodom CRISPR/Cas9
(Targeted inactivation of the GFP gene in E. coli by the CRISPR/Cas9 method)

Autori
Vuković, Mila

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Sveučilište u Splitu Prirodoslovno-matematički fakulte

Mjesto
Split

Datum
22.10

Godina
2019

Stranica
68

Mentor
Jasna Puizina (mentor), Ivica Aviani (komentor)

Ključne riječi
CRISPR/Cas9, ciljana inaktivacija gena, GFP, AFM, invertni optički mikroskop
(CRISPR, Cas9, gRNA, genetic engineering, AFM)

Sažetak
U radu je prikazana primjena metode CRISPR/Cas9 za ciljanu inaktivaciju gena koji kodira za zeleni fluorescentni protein (GFP) u bakteriji E. coli. Eksperiment je proveden tako da su se primjenom bioinformatičkih alata dizajnirale vodeće RNA molekule čiji su odgovarajući DNA oligonukleotidi uneseni u plazmid BPK764. Taj plazmid je specifičan po tome što sadrži gen za kaspazu Cas9 i insercijsko mjesto za unos molekule sgRNA. Drugi ključni plazmid je pGLO jer on sadrži gen GFP čija je inaktivacija cilj ovog rada. Uspješna inaktivacije gena GFP je provedena primjenom sustava CRISPR/Cas9 što je pokazano vizualizacijom kontrolnih i eksperimentalnih skupina bakterija na UV transiluminatoru. Bakterije obiju skupina snimljene su mikroskopom atomskih sila (AFM) primjenom kvantitativnog načina rada (QI) i invertnim optičkim mikroskopom s fluorescentnim filterom na kojem je također potvrđena uspješnost provedenog eksperimenta.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Fizika, Biologija, Interdisciplinarne prirodne znanosti, Biotehnologija

POVEZANOST RADA