Naslov
Razvoj testa za mjerenje aktivnosti enzima lipaze porijeklom iz Thermomyces lanuginosus
(Development of the assay for measurement of Thermomyces lanuginosus lipase activity)

Autori
Šibalić, Darijo ; Šalić, Anita ; Zelić, Bruno ; Tišma, Marina

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Sažeci sa skupova, sažetak, znanstveni

Izvornik
XIII. Susret mladih kemijskih inženjera / Dejanović, Igor ; Vrsaljko, Domagoj ; Žižek, Krunoslav - Zagreb : Hrvatsko društvo kemijskih inženjera i tehnologa (HDKI), 2020, 39-39

ISBN
978-953-6894-71-0

Skup
XIII. susret mladih kemijskih inženjera (SMLKI 2020)

Mjesto i datum
Zagreb, Hrvatska, 20.02.2020. - 21.02.2020

Vrsta sudjelovanja
Predavanje

Vrsta recenzije
Domaća recenzija

Ključne riječi
lipaza ; test za mjerenje aktivnosti lipaze ; Hillov model
(lipase ; assay for lipase activity measurement ; Hills model)

Sažetak
Enzim lipaza katalizira hidrolizu u vodi netopivog estera p-nitrofenil palmitata (pNPP) u p- nitrofenol (pNP) na granicama faza (stabiliziranih emulgatorom) voda : organsko otapalo. U svrhu razvoja brzog i pouzdanog spektrofotometrijskog testa za mjerenje aktivnosti enzima lipaze porijeklom iz Thermomyces lanuginosus (TLL), u ovom radu ispitan je utjecaj pufera (pH = 7-10), 8 organskih otapala (acetonitril, metanol, izopropanol, etanol, 2-etoksietanol, DMSO, aceton i 1, 4-dioksan) i 11 emulgatora (Arapska Guma, PEG 4000, PEG 6000, Triton X-45, Triton X 100, SDS, CTAB, Tween 20, Tween 40, Tween 80 i Span 80) na aktivnost enzima lipaze. Hidrolitička aktivnost TLL mjerena je spektrofotometrijski kao dinamička promjena apsorbancije u vremenu pri valnoj duljini,  = 440 nm. Maksimalna aktivnost enzima lipaze postignuta je pri sljedećim procesnim uvjetima: a) pH = 9 (50 mmol dm-3 Tris-HCl pufer) ; b) volumni udio acetonitrila u reakcijskoj smjesi 4% (v/v) ; c) maseni udio Arapske Gume 0, 3% (w/v). Za opis brzine reakcije korištena su i uspoređena dva kinetička modela: Michaelis- Menteničin kinetički model i Hillov kinetički model. Iz kinetičkih podataka ovisnosti volumne aktivnosti enzima o početnoj koncentraciji supstrata nelinearnom regresijom su procijenjene parametri kinetičkih modela (Michaelis-Menteničin model: Km = 0, 173±0, 058 mmol dm-3, Vm = 266.593±26285 U cm-3 ; Hillov model: Km = 0, 173±0, 010 mmol dm-3, Vm = 222.781±9112 U cm-3). Potvrđeno je da se Michaelis-Menteničin kinetički model ne može koristiti za opis eksperimentalnih podataka hidrolize pNPP-a katalizirane enzimom lipaza porijeklom iz T. lanuginosus, odnosno da ove podatke bolje opisuje Hillov kinetički model.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biotehnologija

POVEZANOST RADA