Naslov
Ispitivanje stabilnosti glutationa u uzorcima plazme i krvi
(Testing of glutathione stability in serum and plasma samples)

Autori
Vujeva, Vesna

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Farmaceutsko-biokemijski fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
12.06

Godina
2019

Stranica
35

Mentor
Domijan, Ana-Marija

Neposredni voditelj
Gerić, Marko

Ključne riječi
glutation, antioksidansi, oksidacijski stres, stabilnost GSH, DTNB, biološki uzorak
(glutathione, antioxidants, oxidative stress, GSH stability, DTNB, biological sample)

Sažetak
Reducirani glutation (GSH) tripeptid je cisteina, glutaminske kiseline i glicina te predstavlja najvažniji neenzimatski antioksidans u organizmu. Cilj ovoga istraživanja bio je optimizirati metodu mjerenja GSH u ljudskoj krvi i plazmi te ispitati stabilnost GSH prilikom pohranjivanja uzoraka. Uzorci krvi i plazme pribavljeni su od dobrovoljnog davatelja krvi. Ispitivanje stabilnosti GSH provedeno je tako da je jedan uzorak podijeljen u četiri epruvete. U prvom uzorku plazme ili krvi koncentracija GSH izmjerena je odmah. Dio je uzoraka pohranjen u inkubatoru (na 37 °C u vlažnoj atmosferi s 5% CO2), a preostala po dva uzorka nakon sakupljanja pospremljeni su u zamrzivač na -20 °C na 8 i 30 dana. Koncentracija GSH izmjerena je pomoću Ellmanovog reagensa (5, 5'-ditiol-(2-nitrobenzojeva kiselina), DTNB), spektrofotometrijski pri valnoj duljini  = 412 nm i sobnoj temperaturi. Reakcija tiolne skupine GSH s DTNB-om odvija se na sobnoj temperaturi i pH = 7, 4 pri čemu nastaje žuti produkt 5'-tio-2-nitrobenzojeva kiselina (TNB). Mjerenja su provedena na UV-Vis spektrofotometru, a koncentracija GSH određena je pomoću molarnog apsorpcijskog koeficijenta (ε) koji iznosi 14, 15 x 10-3 M-1 cm-1. Ispitivanja su pokazala da je centrifugiranje plazme, prije spektrofotometrijskog određivanja GSH optimalno kako bi se uklonio dio interferencija koje bi mogle reagirati sa DTNB reagensom i odredila koncentracija GSH. Za određivanje koncentracije GSH u krvi potrebno je krv tretirati s 5 % klorovodičnom kiselinom kako bi se uklonile interferencije i omogućilo određivanje GSH. Nakon pohranjivanja uzorka krvi na 37 °C u vlažnoj atmosferi tijekom 24 sata uočen je statistički značajan porast koncentracije GSH i u plazmi i u krvi te se može zaključiti da su ovi uvjeti potakli sintezu GSH u krvnim stanicama. U uzorcima plazme i krvi pohranjenima -20°C tijekom 8 i 30 dana nisu uočene statistički značajne razlike u koncentraciji GSH. Stoga se može zaključiti da prilikom pohranjivanja uzoraka plazme i krvi na -20 °C do 30 dana ne dolazi do razgradnje GSH.

Izvorni jezik
Hrvatski

POVEZANOST RADA