Naslov
Auksin-hidrolaze: analiza i regeneracija mutanata uročnjaka (Arabidopsis thaliana L.)
(Auxin hydrolases: analysis and regeneration of Arabidopsis thaliana mutants)

Autori
Zulji, Amel

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
16.02

Godina
2017

Stranica
54

Mentor
Bauer, Nataša

Ključne riječi
indol-3-octena kiselina, konjugati indol-3-octene kiseline, pojačana ekspresija, floral dip
(indole-3-acetic acid, indole-3-acetic acid conjugates, overexpression, floral dip)

Sažetak
U ovom radu su opisani mehanizmi biosinteze, transporta i konjugacije indol-3-octene kiseline (IAA), kao dominantnog oblika auksina, i njen učinak na razvojne i fiziološke procese, s posebnim osvrtom na spoznaje o detaljima tih procesa kod eksperimentalne biljke Arabidopsis thaliana. Tehnologijom infusion sintetiziran je binarni vektor pHOV:AtILL2-GFP, te su metodom floral dip regenerirane transgenične biljke A. thaliana ekotip WS i Col-0 s pojačanom ekspresijom gena AtILL2 i rekombinantnog gena AtILL2-GFP. Lokalizacija fuzijskog proteina AtILL2-GFP, praćena fluorescencijskom mikroskopijom, sugerira endoplazmatski retikulum kao mjesto djelovanja hidrolaze ILL2, što je u skladu s dosadašnjim rezultatima istraživanja. Analizirane su mutante s utišanom ekspresijom gena AtILR1, AtILL2 i AtIAR3, te je metodama PCR-a i elektroforeze izdvojena jednostruka nul mutanta ill2-1 u kojoj je identificirana insercijska mutacija u genu AtILL2 koja uzrokuje pomak u okviru čitanja i sintezu krnjeg, nefunkcionalnog proteina. Metodama PCR-a i sekvenciranja izdvojene su jednostruke mutante ilr1-1 i iar3-2 u kojima je identificirana mutacija Gly224Glu u genu AtIAR3 (mutanta iar3-2) i mutacija Gly139Asp u genu AtILR1 (mutanta ilr1-1) koje uzrokuju potpuni ili djelomični gubitak funkcije hidrolaza ILR1 i IAR3. Kombinacijom PCR-a, elektroforeze i sekvenciranja izdvojena je dvostruka mutanta ill2-1/iar3-2 koja ima mutaciju Gly224Glu u genu AtIAR3 i insercijsku mutaciju u genu AtILL2, i trostruka mutanta ilr1-1/ill2-1/iar3- 2 koja ima mutaciju Gly139Asp u genu AtILR1, insercijsku mutaciju u genu AtILL2 i mutaciju Gly224Glu u genu AtIAR3. Mutante dobivene i analizirane u ovom radu dalje će se koristiti za istraživanja metabolizam IAA naročito tijekom izloženosti biljaka abiotskom stresu.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA