Naslov
Kemo-enzimska sinteza <i>S</i>-glikozida pomoću tioglikoligaze iz <i>Escherichia coli</i>
(Chemo-enzymatic synthesis of <i>S</i>-glycoside using thioglycoligase from <i>Escherichia coli</i>)

Autori
Kardum, Iva

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Kemijsko-tehnološki fakultet

Mjesto
Split

Datum
27.10

Godina
2015

Stranica
65

Mentor
Burčul, Franko

Neposredni voditelj
Richard Daniellou

Ključne riječi
kemo-enzimska sinteza ; <i>S</i>-glikozid ; <i>E. coli</i> ; SDS-PAGE ; TLC
(chemo-enzymatic synthesis ; <i>S</i>-glikozid ; <i>E. coli</i> ; SDS-PAGE ; TLC)

Sažetak
U ovom radu uzgojena je bakterija <i>Escherichia coli</i> te je pomoću izopropil-<i>β</i>-D-1-tiogalaktopiranozid (IPTG) potaknuta eksprimacija tioglikoligaze. Nakon tog se pristupilo izolaciji tioglikoligaze na način da se najprije lizom (razbijanjem stanične stjenke) oslobodio stanični sadržaj <i>E. coli</i> te se nakon toga pristupilo pročišćavanju proteina različitim tehnikama, da bi uklonili neželjene tvari. Natrij dodecil sulfat-poliakrilamid gel elektroforeza (engl. <i>sodium dodecylsulphate-polyacrylamide gel electrophoresis</i> ; SDS-PAGE), je korištena za potvrdu izoliranog enzima u svim fazama uzgoja bakterije, izolacije i pročišćavanja. Pročišćena tioglikoligaza je korištena za sintezu <i>S</i>-glikozida. Nakon sinteze, dobiveni <i>S</i>-glikozid je pročišćavan u nekoliko faza različitim tehnikama kolonske kromatografije. Tankoslojnom kromatografijom (engl. <i>thin layer chromatography</i> ; TLC) se dokazalo da je dobiven glikozid. U ovom radu je za sintezu S-glikozida korišten enzim odnosno kemo-enzimska sinteza. Enzimi omogućuju stereoselektivnost i regioselektivnost te nema potrebe za zaštitom funkcijskih skupina na supstratu što najčešće nije slučaj kod klasične organske sinteze. Na taj način se smanjuje vrijeme trajanja sinteze i troškovi kemikalija. <br><br> <b>Summary</b> <br><br> In this thesis <i>Escherichia coli</i> was grown and expression of thioglycoligase was induced using isopropyl-<i>β</i>-D-1-thiogalactopiranoside (IPTG). Isolation of thioglycoligase from <i>E. coli</i> cell content, obtained by lysis (cell membrane breakdown), was performed using various isolation and purification techniques. Sodium dodecylsulphate-polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE), was used to confirm isolated and purified thioglycoligase in all phases. Purified thioglycoligase was used for <i>S</i>-glycoside synthesis. The obtained <i>S</i>-glycoside was purified in several steps using different column chromatography techniques. Thin layer chromatography (TLC) was employed for glycoside confirmation. Chemo-enzymatic synthesis for <i>S</i>-glycoside was used in this thesis as a mean of better stereoselective and regioselective synthesis in contrast to classic organic synthesis. Chemo-enzymatic synthesis also doesn't require substrate functional groups protection and all said enables shorter time of synthesis as well as lower synthesis cost.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija

POVEZANOST RADA