Naslov
ODREĐIVANJE PRISUTNOSTI DISULFIDNIH VEZA U NGR PREUSMJERAVAJUĆEM SLIJEDU UGRAĐENOM U VLAKNO ADENOVIRUSNOG VEKTORA
(Assessing existence of disulfide bonds in NGR retargeting motif inserted in fiber of adenovirus vector)

Autori
Nestić, Davor

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prehrambeno-biotehnološki fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
29.09

Godina
2015

Stranica
82

Mentor
Majhen, Dragomira

Ključne riječi
adenovirus; NGR; disulfidne veze
(adenovirus; NGR; disulfide bonds)

Sažetak
Adenovirusi se u genskoj terapiji tumora koriste kao vektori za prijenos genskog materijala do tumora ili stanica koje podržavaju rast tumora kao što su endotelne stanice u angiogenezi. Ugradnjom preusmjeravajućeg slijeda u kapsidni protein replikacijski defektnog adenovirusa može se povećati specifičnost vezanja adenovirusnog vektora na ciljnu stanicu. Preusmjeravajući slijed NGR se veže na aminopeptidazu N koja je jako eksprimirana na endotelnim stanicama u angiogenezi, čime predstavlja moguću metu za usmjeravanje adenovirusnog vektora s ugrađenim NGR peptidnim slijedom, a sve s ciljem inhibicije angiogeneze. Pokazano je da aminokiselinski okoliš koji omeđuje NGR slijed ima ulogu u specifičnosti preusmjeravanja adenovirusnih vektora, a posebnu ulogu ima ciklizacija posredovana disulfidnim vezama. Cilj ovog rada bio je utvrditi postojanje disulfidnih veza u preusmjeravajućem slijedu C539NGRC543VSGC547AGRC551 ugrađenom u HI petlju vlakna AdFNGR te ako postoje, identificirati spektrometrijom masa koji su cisteini uključeni u stvaranje disulfidnih veza. Nadalje, cilj je bio utvrditi važnost stvaranja disulfidnih veza na preusmjeravanje i djelotvornost transdukcije stanica rabdomiosarkoma čovjeka (RD) i stanica tumora dojke čovjeka (MDA-MB-435S) obradom AdFNGR ditiotreitolom. Spektrometrijom masa je pokazano da cistein na poziciji 539 ne stvara disulfidne veze s preostala tri cisteina u preusmjeravajućem slijedu C539NGRC543VSGC547AGRC551. Ovim eksperimentalnim pristupom nije se dokazalo postoji li disulfidna veza između cisteina C543, C547 i C551. Obrada AdFNGR ditiotreitolom dokida povećanu djelotvornost transdukcije RD i MDA-MB- 435S stanica u odnosu na Adwt, što upućuje na moguće postojanje disulfidnih veza u preusmjeravajućem slijedu koje omogućuju povoljniju konformaciju HI petlje u AdFNGR i posljedično tome bolje vezanje i internalizaciju adenovirusa u stanicu.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA