Naslov
Optimizacija adenovirusne transdukcije humanog mišićnog tkiva u svrhu razvoja genske terapije ex vivo
(Optimization of adenoviral transduction of the human muscle tissue for the development of gene therapy ex vivo)

Autori
Vetma, Vesna

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
19.12

Godina
2014

Stranica
47

Mentor
Marijanović, Inga

Neposredni voditelj
Antunović, Maja

Ključne riječi
adenovirusi; BMP-2; prednja ukrižena sveza; osteogeneza; matične stanice
(adenovirus; BMP-2; Anterior cruciate ligament reconstruction; osteogenesis; stem cells)

Sažetak
Potreba za poboljšanjem cijeljenja koljena u fokusu je ortopedske kirurgije. Jedan od pristupa liječenju je poticanje osteogeneze kako bi se ostvarilo bolje koštano-tetivno cijeljenje. Kako bi se to postiglo, osteogeni induktori moraju biti prisutni u dovoljnoj količini tijekom dovoljnog dugog vremenskog perioda da bi potakli osteogenezu. Jedan od načina kako to ostvariti je genska terapija. Prijenosom gena putem adenovirusnog vektora moguće je potaknuti ljudski skeletni mišić na proizvodnju osteogenih induktora te ga potom vratiti na mjesto cijeljenja. Nužno je da se operacija i modificiranje mišića naprave unutar dva sata. Cilj ovog istraživanja je bio optimizirati protokol za transdukciju in vitro ljudskog skeletnog mišića s replikacijski defektnim adenovirusnim vektorom koji nosi reporterski gen za enzim luciferazu. Efikasnost transdukcije bila je ispitana u ovisnosti o broju adenovirusnih čestica, vremenu kontakta mišićnog tkiva i virusa i prisutnosti kalcijevih i/ili lantanovih iona. Korišteni adenovirusni vektor pripada prvoj generacije adenovirusa (ΔE1, ΔE3), serotip 5, s ugrađenim reporterskim genom za enzim luciferazu pod promotorom ljudskog citomegalovirusa. Virusi su umnoženi u stanicama HEK 293, pročišćeni u gradijentu cezijevog klorida i dijalizirani. Mjerenjem optičke gustoće ustanovljen je titar od 1011 do 1012 čestica/mL i 5x1010 PFU/mL prema standardnom testu formiranja plakova. Mišići su transducirani adenovirusnim vektorom koji nosi reporterski gen za luciferazu. Nakon inkubacije izolirani su ukupni proteini i proveden je test za luciferazu. Transdukcija je bila ovisna o titru virusa, vremenu kontakta mišića i virusa te prisutnosti lantanovih i/ili kalcijevih iona. Mišići su bili transducirani s Ad.BMP-2 prema optimiziranom protokolu da bi se potakla osteogeneza. Osteogeneza je potvrđena kvantitivnim PCR-om. Optimalan broj infektivnih virusnih čestica za transdukciju mišićnog tkiva bio je 109 PFU, a optimalno vrijeme transdukcije 30 minuta.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija, Temeljne medicinske znanosti, Kliničke medicinske znanosti

POVEZANOST RADA