Naslov
Supstratna specifičnost auksin-amidohidrolaze IAR3 iz kineskog kupusa (Brassica rapa L.)
(Substrate specificity of auxin-amidohydrolase IAR3 from Chinese cabbage (Brassica rapa L.))

Autori
Grenković, Renata

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
21.12

Godina
2012

Stranica
66

Mentor
Salopek-Sondi, Branka

Ključne riječi
auksin-amidohidrolaza; konjugati auksina; HPLC; kineski kupus; Brassica rapa L. ssp. pekinensis (Lour.)
(auxin-amidohydrolase; auxin conjugates; HPLC; Chinese cabbage; Brassica rapa L. ssp. pekinensis (Lour.))

Sažetak
Auksini su biljni hormoni koji imaju ključnu ulogu u gotovo svim procesima rasta i razvitka biljaka. Auksini, poglavito indol-3-octena kiselina (IAA), u niskim koncentracijama djeluju stimulativno dok su u višim koncentracijama toksični za biljku. Proces konjugacije IAA s aminokiselinama ili šećerima predstavlja dio homeostatskog mehanizma kojim se suvišak IAA skladišti ili detoksificira. Enzimi auksin-amidohidrolaze hidroliziraju aminokiselinske konjugate auksina oslobađajući aktivne spojeve. Auksin-amidohidrolaze su metaloenzimi iz M20 porodice peptidaza. Predmet istraživanja u ovom radu je auksin-amidohidrolaza BrIAR3 izolirana iz kineskog kupusa (Brassica rapa L. ssp. pekinensis (Lour.)). Cilj ovog rada bio je ispitati specifičnost enzima BrIAR3 spram konjugata auksina (IAA-Ala, IBA-Ala, IPA-Ala) te testom inhibicije rasta korijena in vivo ispitati fiziološku aktivnost slobodnih auksina (IAA, IPA, IBA) i njihovih konjugata. Rekombinantni protein BrIAR3 pripremljen je metodom heterologne ekspresije u kulturi bakterije Escherichia coli, te izoliran i pročišćen afinitetnom kromatografijom pomoću Ni-NTA agaroze. Čistoća proteina provjerena je elektroforezom u poliakriamidnom gelu u denaturirajućim uvjetima (SDS-PAGE). Određena je enzimska aktivnost BrIAR3, pri čemu su produkti reakcija analizirani metodom tekućinske kromatografije visoke učinkovitosti (HPLC). Bioinformatička analiza proteina provedena je korištenjem on-line programa. Utvrđeno je da protein BrIAR3 preferira konjugat aminokiseline alanina s dugolančanim auksinom indol-3-propionskom kiselinom (IPA-Ala) kao supstrat. Testom inhibicije rasta korijena utvrđeno je da među slobodnim auksinima najsnažnije inhibitorno djelovanje iskazuje IAA, a među ispitivanim konjugatima IPA-Ala, što upućuje na oslobađanje aktivne, slobodne forme auksina djelomično aktivnošću auksin-amidohidrolaze BrIAR3.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA