Naslov
Enzim purinska nukleozidna fosforilaza iz bakterije Escherichia coli: katalitički mehanizam i analiza strukture
(Enzyme purine nucleoside phosphorylase from Escherichia coli: Catalytic mechanism and analysis of structure)

Autori
Mikleušević, Goran

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, doktorska disertacija

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
13.12

Godina
2010

Stranica
137

Mentor
Luić, Marija

Ključne riječi
purinska nukleozidna fosforilaza; aktivno mjesto; konformacijska promjena; kooperativnost
(purine nucleoside phosphorylase; active site; conformational change; cooperativity)

Sažetak
Biološki aktivni oblik purinske nukleozidne fosforilaze (PNPaze) iz bakterije Escherichia coli je homoheksamer koji se može opisati kao trimer dimera. Pripremljeni mutanti: Arg24Ala, Asp204Ala, Asp204Asn, Arg217Ala i Asp204Ala/Arg217Ala poslužili su u istraživanju katalitičkog mehanizma izučavanog enzima. Analiza specifične aktivnosti svih mutanata prema adenozinu, inozinu, gvanozinu i N(7)-metil-gvanozinu potvrđuje da mehanizam uključuje prijenos protona na N-7 položaj purinske baze putem bočnog ogranka Asp204. Kinetika enzimske reakcije i analiza kristalnih struktura kompleksa PNPaze s fosfatnim/sulfatnim ionom pokazuju da konformacijska promjena aktivnog mjesta monomera u dimeru je bitan čimbenik u procesu katalize. Ta je promjena isključivo rezultat vezanja ortofosfata. Značajnu ulogu pritom ima Arg24, jer njegovom mutacijom u alanin ne dolazi do konformacijske promjene, a razina kooperativnosti podjedinica značajno se smanjuje. Asp204 i Arg217 ne utiču na konformacijsku promjenu, međutim, imaju neposrednu ulogu u regulaciji razine kooperativnosti.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija, Biologija

POVEZANOST RADA