Naslov
Kloniranje, prekomjerna ekspresija te pročišćavanje molekula tRNAIle i tRNAVal iz bakterije Escherichia coli
(Cloning, overexpression and purification of Escherichia coli tRNAIle and tRNAVal)

Autori
Cvetešić, Nevena

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
15.10

Godina
2010

Stranica
90

Mentor
Gruić-Sovulj, Ita

Ključne riječi
tRNA ; aminoacil-tRNA-sintetaze ; mehanizmi popravka pogreške ; kromatografija obrnutih faza ; posttranskripcijske modifikacije
(tRNA ; aminoacyl-tRNA synthetases ; editing mechanisms ; reverse phase chromatography ; posttranscriptional modifications)

Sažetak
Aminoacil-tRNA-sintetaze su enzimi koji kataliziraju nastajanje kovalentne veze između pripadnog para aminokiseline i molekule transfer tRNA (tRNA). Budući da je točnost aminoaciliranja temeljni preduvjet za vjeran prijenos genetičke informacije, ti enzimi su razvili mehanizme popravka kako bi uklonili pogreške nastale prilikom aktivacije nepripadne aminokiseline (popravak prije prijenosa), odnosno prijenosa pogrešne aminokiseline na tRNA (popravak poslije prijenosa). tRNA vrlo često potiče popravak prije prijenosa aminokiseline ali mehanizam tog procesa još nije poznat. U nekim slučajevim tRNA (npr. tRNAIle) mora sadržavati postranskripcijske modifikacije kako bi mogla poticati reakciju popravka. Velike količine biološki aktivne tRNA potrebne su za istraživanja mehanizma tRNA-ovisnog popravka izoleucil- i valil-tRNA-sintetaze. Priređeni su rekombinantni plazmidi za prekomjernu ekspresiju tRNAIle i tRNAVal pod kontrolom jakog T7 promotora. Optimiran je sustav za preparativnu proizvodnju molekula tRNA in vivo i razvijena je brza i efikasna metoda pročišćavanja posttranskripcijski modificirane tRNA kromatografijom obrnutih faza. Metodama enzimske kinetike istražena su svojstva pripravljenih tRNA.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija, Biologija

POVEZANOST RADA