Naslov
Uspostavljanje sustava transpozon mutageneze za bakteriju Paenibacillus larvae
(Development of transposon mutagenesis system for use in bacteria Paenibacillus larvae)

Autori
Tlak Gajger, Ivana

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, doktorska disertacija

Fakultet
Veterinarski fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
25.02

Godina
2010

Stranica
130

Mentor
Vugrek, Oliver ; Petrinec, Zdravko

Ključne riječi
američka gnjiloća medonosne pčele; Paenibacillus larvae; transpozon mutageneza; plazmid; genetička istraživanja
(American foulbrood; Paenibacillus larvae; transposon mutagenesis; plasmid; genetic examinations)

Sažetak
Američka gnjiloća medonosne pčele (AGMP) je bolest pčelinjeg legla uzrokovana sporogenom bakterijom Paenibacillus larvae. Zbog visoke otpornosti spora uzročnika, posebnog načina suzbijanja bolesti, te nedopuštenog liječenja antibioticima, jedna je od najtežih pčelinjih bolesti raširena u svijetu. P. larvae uzrokuje ugibanje svake zaražene pčelinje ličinke, a zbog tvrdokornosti i infektivnosti uzročnika uvijek propada cijela pčelinja zajednica. AGMP - e nanosi značajne ekonomske gubitke pčelarstvu i gospodarske štete u poljoprivredi. Molekularni mehanizmi zaražavanja pčelinjih ličinaka bakterijom P. larvae su nepoznati, pa je cilj ovog istraživanja stvaranje uvjeta za izvođenje i prvo uspostavljanje suvremenog sustava transpozon mutageneze. U istraživanju primijenjene su molekularno biološke metode karakterizirane rekombinantnom DNK tehnologijom. U ovoj disertaciji po prvi put je opisano uspostavljanje sustava transpozon mutageneze za bakteriju P. larvae. Utvrđeni su uvjeti za umnažanje navedene bakterije u kontroliranim laboratorijskim uvjetima, sastavljen je prokariotski plazmidni vektor pPLT1, te provedena mutageneza P. larvae. Za bioinformatičko analiziranje u daljnjim istraživanjima uspostavljena je „knjižnica“ od 5000 transpozon mutanti. Na primjeru jedne transpozon mutante kojoj je određen slijed nukleotida dokazana je integracija transpozona u genom P. larvae. Time je potvrđeno da je plazmidni vektor pPLT1 prikladan za izvođenje transpozon mutageneze, a ciljno mjesto može predstavljati bilo koji gen bakterije P. larvae. Funkcionalna analiza navedenih mutanti omogućuje otkrivanje čimbenika virulencije proučavane bakterije, što pridonosi razumijevanju mehanizama patogeneze, te usmjeruje daljnja istraživanja ka učinkovitim načinima liječenja i suzbijanja AGMP – e. Sustav transpozon mutageneze za bakteriju P. larvae je vrlo vrijedan molekularni alat koji se uz određene izmjene može primijeniti i za genetička istraživanja na mnoge druge gram pozitivne bakterije, patogene za kukce, ali i ostale skupine i vrste životinja.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Veterinarska medicina, Biotehnologija

POVEZANOST RADA