Pregled bibliografske jedinice broj: 402601
Fluorescentna proba za aktivni oblik GTPaze Rac1A je lokalizirana na mjestima polimerizacije aktina u stanicama D. discoideum
Fluorescentna proba za aktivni oblik GTPaze Rac1A je lokalizirana na mjestima polimerizacije aktina u stanicama D. discoideum // 50 godina molekularne biologije u Hrvatskoj, Zbornik sažetaka / Zahradka, Ksenija ; Plohl Miroslav ; Ambriović-Ristov, Andreja (ur.).
Zagreb, 2008. str. 61-61 (poster, domaća recenzija, sažetak, znanstveni)
CROSBI ID: 402601 Za ispravke kontaktirajte CROSBI podršku putem web obrasca
Naslov
Fluorescentna proba za aktivni oblik GTPaze Rac1A je lokalizirana na mjestima polimerizacije aktina u stanicama D. discoideum
(A fluorescent probe for active Rac1A localizes to the sites of actin polymerization in social amoeba D. discoideum)
Autori
Filić, Vedrana ; Marinović, Maja ; Faix, Jan ; Weber, Igor
Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Sažeci sa skupova, sažetak, znanstveni
Izvornik
50 godina molekularne biologije u Hrvatskoj, Zbornik sažetaka
/ Zahradka, Ksenija ; Plohl Miroslav ; Ambriović-Ristov, Andreja - Zagreb, 2008, 61-61
ISBN
978-953-6690-78-7
Skup
50 godina molekularne biologije u Hrvatskoj
Mjesto i datum
Zagreb, Hrvatska, 20.11.2008. - 21.11.2008
Vrsta sudjelovanja
Poster
Vrsta recenzije
Domaća recenzija
Ključne riječi
Dictyostelium; Rac1; GTPaza; citoskelet; aktin
(Dictyostelium; Rac1; GTPase; cytoskeleton; actin)
Sažetak
Rac1A pripada obitelji monomernih Rho GTPaza ključnih za regulaciju aktinskog citoskeleta. S ciljem rasvjetljavanja uloge Rac1A u protistu D. discoideum, odlučili smo kreirati fluorescentnu probu koja bi specifično vezala aktivni oblik te GTPaze. Obzirom na veliku srodnost Rac GTPaza iz Dictyostelium-a, za odabir proteinske domene specifične za aktivni Rac1A korišten je sustav dva hibrida u kvascu kojim su testirane interakcije 4 potencijalna partnera s 11 Rac proteina. Odabrali smo DGAP1, protein srodan IQGAP proteinu, koji veže aktivni Rac1A u tetramernom kortikalnom kompleksu. Također smo testirali i njegovu GBD (GTPase binding domain) domenu. Osim toga, testirali smo još dva efektora Rac proteina specifična po tzv. CRIB (Cdc/Rac interactive binding) motivu ; PBD (p21-binding domain) domenu iz Dictyostelium kinaze PAKa i GBD domenu iz štakorske kinaze PAK1. Samo je posljednja reagirala s Rac1A u strogim uvjetima selekcije sustava dva hibrida u kvascu i jedina nije interagirala s konstitutivno neaktivnim oblikom. Nakon što je interakcija štakorske PAK1_GBD s Rac1A potvrđena afinitetnim pročišćavanjem pomoću glutation-sefaroze, ova je domena N-terminalno fuzionirana s YFP i eksprimirana u divljem tipu stanica. U nepokretnim stanicama proba je bila lokalizirana u korteks, dok je kod stanica u kretanju uvijek bila smještena u vodeći rub stanice. Tijekom fagocitoze i makropinocitoze lokalizirala je u endocitotsku čašicu, dok jedino u citokinezi nije imala naglašenu lokalizaciju.
Izvorni jezik
Hrvatski
Znanstvena područja
Biologija
POVEZANOST RADA
Projekti:
098-0982913-2858 - Regulacija dinamike citoskeleta u kretanju i diobi stanica (Weber, Igor, MZOS ) ( CroRIS)
Ustanove:
Institut "Ruđer Bošković", Zagreb
