Naslov
Utjecaj hipertermije na razvoj zametnog štita štakora u dvotjednoj kulturi in vitro
(Influence of the hyperthermia on development of rat embryo-proper in a two-week in vitro culture)

Autori
Katušić, Ana

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, magistarski rad

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
17.07

Godina
2008

Stranica
97

Mentor
Bulić-Jakuš, Floriana

Ključne riječi
diferencijacija; hipertermija; in vitro kultura; nestin; PCNA; rast; zametni štit
(differentiation; embryo proper; growth; hyperthermia; in vitro culture; nestin; PCNA)

Sažetak
U radu je istraživan utjecaj hipertermije na postimplantacijski zametak sisavaca u dvotjednoj kulturi in vitro. Zametni cilindri štakora soja Fisher stari 9, 5 dana su izolirani i odstranjen im je ekstraembrionalni dio. Zametni štitovi (zameci bez ekstraembrionalnog dijela) su kultivirani 14 dana na vlažnom lećnom papiriću na metalnoj mrežici u kontaktu sa medijem i zrakom. Za kulturu je korišten kemijski definirani Eagleov minimalni esencijalni medij koji je sadržavao 50% štakorskog seruma ili 50μ g/ml transferina. Eksperimentalni zameci su kultivirani na raznim temperaturama (430C, 420C ili 40, 50C) u različitom vremenskom periodu (15 minuta do 14 dana). Medij je mijenjan svaki drugi dan i pritom su mjereni veći i manji promjeri eksplantiranih zametaka. Zameci su fiksirani u St. Marie fiksativu i obrađeni za klasičnu histologiju ili imunohistokemiju. Korištena su protutijela za anti-Hsp70 (Biogenex), te za nuklearni antigen proliferirajućih stanica (PCNA) (Dako) i nestin (Hybridoma Bank) čija je ekspresija vizualizirana pomoću Dako ARK Animal Research kita i Dako EnVision Doublestain System kita. U kulturama sa dodatkom seruma opaženo je povećanje promjera eksplantata 5.-og dana kulture kada je hipertermija od 420C 15 minuta primijenjena na početku kultiviranja. Kad su zameci izloženi temperaturi od 430C 30 minuta svaki dan tijekom prvih 7 dana kulture sveukupni rast je bio smanjen, još i više kad su stavljeni na 430C tijekom prva 24 sata kulture, kada je i preživljenje eksplantata bilo značajno reducirano. Zameci izloženi dugotrajnoj hipertermiji od 40, 50C pokazali su malu redukciju u preživljenju, ali značajno smanjenje rasta opaženo je kad su stavljeni na 40, 50C nakon što su prva 24 sata proveli na 370C, još i više kad je u medij za kulturu dodano anti-Hsp70 protutijelo. Također, kad je hipertermija od 40, 50C primijenjena kroz cijeli period kulture, smanjenje rasta i preživljenja je bilo veće u kulturama bez seruma nego u onih sa dodatkom seruma. Nakon 14 dana u izraslim teratomu-sličnim strukturama nađeno je više tkiva sličnog crijevu i miotuba kad su zameci stavljeni na 420C u trajanju od 15 minuta, te manje razvijene hrskavice kad su stavljeni na 40, 50C drugi dan. Nadalje, ekspresija PCNA i nestina bila je obilna u eksplantatima i nije se bitno razlikovala od kontrole. Može se zaključiti da je zametni štit u ovom modelu postimplantacijskog razvoja osjetljiv na kratkotrajnu jaču hipertermiju ovisno o dozi, te na slabiju hipertermiju primijenjenu u dužem razdoblju. U kulturama bez seruma efekt slabije dugotrajne hipertermije bio je puno očigledniji nego u kulturama sa serumom.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Temeljne medicinske znanosti

POVEZANOST RADA