Naslov
Izdvajanje DNA kromatografijom
(Separation of DNA by chromatography)

Autori
Forčić, Dubravko ; Branović Čakanić, Karmen

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Poglavlja u knjigama, znanstveni

Knjiga
Metode u molekularnoj biologiji

Urednik/ci
Ambriović, Ristov, Andreja i dr.

Izdavač
Institut Ruđer Bošković

Grad
Zagreb

Godina
2007

Raspon stranica
181-189

ISBN
978-953-6690-72-5

Ključne riječi
kromatografija, DNA
(chromatography, DNA)

Sažetak
U ovom će poglavlju biti opisana kromatografska metoda izdvajanja plazmidne DNA, te humane i bakterijske genomske DNA korištenjem kratkih monolitnih nosača CIM® ; s dietilaminoetilnom (DEAE) aktivnom skupinom. Princip vezanja nukleinskih kiselina na ionski izmjenjivač sastoji se u vezanju negativno nabijene fosfodiesterske veze nukleinske kiseline na pozitivno nabijeni ligand izmjenjivača. Monolitni nosači se koriste u analitičkim i preparativnim odvajanjima bioloških makromolekula s molekularnim masama od nekoliko tisuća pa do nekoliko stotina miliona Daltona. Veliki kapacitet ovih kromatografskih medija za biološke makromolekule kao i posebnost strukture monolitnih nosača koja omogućava prijenos makromolekula konvekcijom (10 mg plazmidne DNA/mL, 20 mg genomske DNA/mL), daje mogućnost izdvajanja većih količina čiste plazmidne i genomske DNA neovisno o ukupnom volumenu uzorka iz kojeg se izdvajanje izvodi ne koristeći toksične organske otopine. Prikladnom regeneracijom diska moguće je višekratno korištenje uz zadržavanje svih svojstava koje ga čine metodom izbora. U ovoj metodi koristi se CIM® ; DEAE disk visine 3 mm, promjera 12 mm i volumena 0, 34 mL od čega 60% čine protočni kanali. Kromatografija na disku se događa u prikladnom polipropilenskom kućištu u koji se disk stavlja neposredno prije kromatografije. Metoda se može izvoditi na HPLC sustavu ili korištenjem peristaltičke pumpe.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA