Naslov
Kloniranje i ekspresija proteina mišjeg interleukina 2, mišjeg interleukina 4, faktora nekroze tumora i humanog faktora nekroze tumora
(Cloning and expression proteins mouse interleukin 2, interleukin 4, tumor necrosis factor and human tumor necrosis factor)

Autori
Babić, Mirjana

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad

Fakultet
Prehrambeno-biotehnološki fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
28.02

Godina
2002

Stranica
56

Mentor
Antolović, Roberto

Ključne riječi
interleukin 2; interleukin 4; faktor necroze tumora; citokini
(interleukin 2; interleukin 4; tumor necrosis factor; cytokines)

Sažetak
RNA izolirana iz mišjih hibridoma H13 stanica, metodom reverzne transkripcije prevedena je u komplementarnu DNA (cDNA). Metodom lančane reakcije polimeraze, uz konstruirane specifične ishodnice umnožene su kodirajuće regije za mišji interleukin 2 (mIL-2), mišji interleukin 4 (mIL-4) i mišji faktor nekroze tumora (mTNFalfa). RNA izolirana iz Jurkat stanica, metodom reverzne transkripcije prevedena je u komplementarnu DNA. Metodom lančane reakcije polimeraze, uz konstruirane specifične ishodnice, umnožena je kodirajuća regija za humani faktor nekroze tumora (hTNFalfa). Umnoženi fragmenti ugrađeni su u plazmidni vektor pET16b, te sekvnecirani. Rezultati sekvenciranja pokazali su da je slijed nukleotida identičan slijedu kodirajuće regije za mišji interleukin 2 (mIL-2), mišji interleukin 4 (mIL-4), mišji faktor nekroze tumora (mTNFalfa) i humani faktor nekroze tumora (hTNFalfa) objavljenom u literaturi. Kodirajuće DNA za gene ugrađeni su u plazmidni vektor PROEXTMHTa. Dobivenim rekombinantnim plazmidima transformirane su kompetentne stanice E. coli BL21-SI. Ekspresija rekombinantnih proteina potaknuta je dodavanjem izopropil-beta-galaktozidaze (IPTG) i potvrđena Western blot analizom.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA