ࡱ> =?<9 v>bjbj)f$l2222222F8|F32r.~2222222$4 7222L$22y3L$L$L$N 22~2L$~2L$L$"'V-@22.f 0$;+sFX. .303*.x7#p7.L$FF2222prirodna Kontaminacija deoksinivalenolom (vomitoksinom) kukuruza roda 1999. godine 1M. Mitak, 1Manuela Zadravec, 2V. Kara i 1Hrvatski veterinarski institut  Odjel za kontrolu krmiva i hranidbu, Zagreb Savska c. 143 2''Poljoprerada'' d.d. Zagreb, Remetine ka c. 77 Sa~etak Tijekom 2000. godine pretra~eno je imunoenzimnim testom na sadr~aj deoksinivalenola 28 uzoraka kukuruza roda 1999. godine, porijeklom s viae podru ja Republike Hrvatske koji su predstavljali oko 1.200 tona kukuruza. Deoksinivalenol je utvren u 18 uzoraka (64,29%) u koncentracijama od 30 do 2000 (ili viae) ppb. Meutim, tek 8 uzoraka (28,57%) sadr~avalo je deoksinivalenola u koncentracijama koje su mogle izazvati promjene zdravstvenog stanja u svinja. Koncentracija mikotoksina daljnjim razrjeivanjem prilikom komponiranja krmnih smjesa joa se smanjuje i tako mo~emo govoriti o prete~ito subtoksi kim i subakutnim intoksikacijama deoksinivalenolom. Istra~ivanje upuuje na u estalu kontaminaciju kukuruza roda 1999. vomitoksinom te vjerojatno i drugim fuzarijskim mikotoksinima koji meusobno mogu poveavati toksi ki u inak, te predla~emo obavezni monitoring ~itarica na sadr~aj fuzarijskih mikoroksina, uz dopunu kromatografskim metodama u analitici. UVOD Suvremene tehnologije u proizvodnji ~itarica nude uvjete koji pogoduju razvoju plijesni te tako i tvorbi mikotoksina (Pepeljnjak i sur.1979; Kiapati 1985). Prilike umjerenih klimatskih podru ja pogoduju razvoju plijesni roda Fusarium te u tim podru jima prevladavaju fuzarijski mikotoksini (Wood, 1992), tako i u naaim podru jima je kontaminacija ''plijesnima polja'' redovita pojava, posebice u kianim godinama. U dosadaanjim je istra~ivanjima dokazano kako se kontaminacija plijesnima roda Fusarium i fuzarijskim mikotoksinima kree od uobi ajenih 20% (Munk i Topolko, 1978; Mitak, 1993; Pavi i i sur. 1999.Mitak, 2000) do ak 82% uzoraka kukuruza (Kralj i sur.1988). Deoksinivalenol (DON, vomitoksin) pripada u skupinu trihotecena, veoma esto se mo~e nai u ~itaricama, uglavnom zajedno s 3-acetildeoksinivalenolom i 15-acetildeoksinivalenolom (Pathre i Mirocha, 1978; Marpegan i sur 1988; Birzele i sur 2000; Fazekas i sur 2000). Mikotoksin i njegovi derivati naj eae u svinja iritiraju sluznicu probavnog trakta uz pojavu poja anog slinjenja, odbijanja hrane te povraanje (Vesonder i sur 1979).Takva karakteristi na klini ka slika rezultira odbijanjem hrane, ili smanjenim unosom hrane, odnosno povraanjem uzete hrane. Djelatna koli ina toksina je prema literaturnim podacima dubiozna, jer su ~ivotinje odbijale hranu s 0,5 mg/kg vomitoksina (Bergsjo i sur 1992), 0,3-0,7 mg/kg nije izazvao ozbiljnije posljedice osim smanjenog uzimanja hrane (Trenholm i sur 1983), ali sli an u inak kod prasadi ima i koli ina od 2 mg/kg (Trenholm i sur 1984), s time kako prirodno stvoreni mikotoksin ima bolji u inak od pro iaenog (Prelusky i sur 1994). Cilj ovog istra~ivanja je otkrivanje prirodne kontmainacije deoksinivalenolom kukuruza uzgojenih u Republici Hrvatskoj, upotrebom imunoenzimne metode (ELISA). MATERIJAL I METODE Uzorci kukuruza u zrnu roda 1999. sakupljani su od prosinca 1999. do rujna 2000. na kontinentalnom dijelu Hrvatske, te sukcesivno pretra~ivani na sadr~aj deoksinivalenola. U detekciji mikotoksina koriateni su komercijalni pripravci tvrtke ''TECNA'', Trst, Italija. Pripravak sadr~i sve potrebne ingradijence za izvedbu testa u ~itaricama i njihovim proizvodima. Deoksinivalenol se ekstrahira vodom, pro isti centrifugiranjem te pretra~i imunoenzimnim postupkom. Intenzitet boje obrnuto je proporcionalan koncentraciji deoksinivalenola. Od rezultata izmjerenih adsorbanci standarda (pri valnoj du~ini od 450 nm) na ini se kalibraciona krivulja (slika 1) pomou koje se odreuje koncentracija deoksinivalenola u uzorcima. Osjetljivost testa kree se izmeu 30  2000 ng/ml (ppb). Slika 1 Shematski prikaz kalibracijske krivulje na semilogaritamskom papiru  EMBED MSGraph.Chart.8 \s  REZULTATI I RASPRAVA Nije bilo razlike u koncentraciji mikotoksina s obzirom na geografsko porijeklo kukuruza, niti na razdoblje u kojem je uzet uzorak, te kad je napravljana pretraga. Rezultati pretrage na deoksinivalenol (tablica 1) ukazuju kako ak 18 od 28 uzoraka sadr~i mikotoksin (64,23%). Tablica 1 Sadr~aj deoksinivalenola u uzorcima kukuruza roda 1999. Redni brojOznaka uzorkaDeoksinivalenol (ppb)269ne sadr~i*1967201611585234240334ne sadr~i2173752451702461901791040256155273ne sadr~i244200246190213425257150194990192850114>2000259ne sadr~i2001200147>2000213430376ne sadr~i335ne sadr~i286ne sadr~i295ne sadr~i357ne sadr~i353ne sadr~i*koncentracija<30ppb Meutim, tek u 8 (28,57%) uzoraka kocentracija se kree od 0,7  >2,0 ppm, odnosno koli ina koja bi kod svinja mogla izazvati vidljive poremetnje zdravstvenog stanja (Trenholm i sur 1983). U sklopu monitoringa mikotoksina u kukuruzu domaeg uzgoja uporabom samo imunoenzimnog postupka orijentacijski mo~emo govoriti o prete~ito subtoksi kim dozama i subakutnim intoksikacijama deoksinivalenolom. Koncentracija mikotoksina tijekom komponiranja krmnih smjesa joa se smanjuje i tako mo~emo rei kako naene koncentracije u tek nekoliko slu ajeva mogu izazvati karakteristi nu sliku otrovanja deoksinivalenolom, bez obzira na visoku u estalost mikotoksina u kukuruzu. Literatura: Bergsjo, B., T. Matre, I. Nafstad (1992): Effects of diets with graded levels of deoxynivalenol on performance in growing pigs. G. of Vet. Med. 39, 752-758. Birzele, B., A. Prange, J. Kramer (2000): Deoxynivalenol and ochratoxin A in German wheat and changes of level in relation to storage parameters. Food Addit. Contam. 17, 1027-1035. Fazekas, B. E.T. Hajdu, A.K. Tar, J. Tanyi (2000): Natural deoxynivalenol (DON) contamination of wheat samples grown in 1998 as determined by high-performance liquid chromatography. Acta Vet. Hung. 48, 151-160. KI`PATI J. (1985): Mikotoksini fusarium vrsta. Seminar za zaatitu bilja (Opatija 20-21. 01. 1985.) Zbornik radova. Zagreb 1985, 481-487. KRALJ M., Z. BIIN i ANKICA NEMANI  (1988): Skupni prikaz sindroma otrovanja mikotoksinima prema podacima iz literature s naro itim osvrtom na pojavu u peradi. Peradarstvo, 23, 215-265. Marpegan, M.R., C.J. Perfumo, H.M. Godoy, M.S. de Miguel, E. Diaz, M.A. Risso (1988): Feed refusal of pigs caused by Fusarium mycotoxins in Argetina. J. Vet. Med. A. 35, 610-616. MITAK M. (1993): Prirodna kontaminacija mikotoksinom zearalenonom i mogunosti brzog dokazivanja u terenskim uvjetima. Vet. stanica 24,139-148. MITAK M. (2000): Nalaz zearalenona u krmivima i krmnim smjesama za svinje od 1990. do 1999. godine. Zbornik radova 2.hrvatski veterinarski kongres, Cavtat 10.-13.-10. 2000. 483  488. MUNK M. i S. TOPOLKO (1978): Ispitivanje frekfencije mikotoksina u krmivima. Krmiva, 20, 95-96 PAVI I Perica, Vlasta Brlek, Ankica Nemani  (1999): U estalost fuzarijskih mikotoksina u krmnim smjesama 1989.  1998. Krmiva 41 (4) 183  189. Pathre, S.V., C.J. Mirocha (1978): Analysis of deoxynivalenol from cultures of Fusarium species. Appl. Env. Microbiol. 35, 992-994. Pepeljnjak, S., s. uturi, S. Topolko, M. Munk (1979): Faktori koji utje u na stvaranje mikotoksina kod kukuruza. Krmiva, 5 109-112. Prelusky, D.B., R.G. Gerdes, K.L. Underhill, B.A. Rotter, P.Y. Jui, H.L. Trenholm (1994): Effects of low-level dietary deoxynivalenol on hematological and clinical parameters of the pig. Nat. Toxins 2, 97-104. Trenholm, H.L., W.P. Cochrane, H. Cohen, J.I. Ellio, E.R. Farnworth, D.W. Friend, R.M.G. Hamilton, J.F. Standish, B.K. Thompson (1983): Survey of vomitoxin contamination of 1980 Ontario white winter wheat crop: results of survey and feeding trial. J. Assn. Off. Anal. Chem. 66, 92-97. Vesonder, R.F., A. Ciegler, H.R. Burmeister, A.H. Jensen (1979): Acceptance by swine and rats of corn amended with trichotecenes. Appl. Env. Microbiol. 38, 433-346. Wood, G.E. (1992): Mycotoxins in foods and feeds in US. J. Anim. Sci. 70, 3941-3949. PAGE  PAGE 4 PAGE  ,["\"v"w"y"%%&&&&('0'<'D'P'\'''''-...P/z/222h3<5@5p7t777889 ::\;/<<L====E>M>N>Q>R>X>Y>Z>\>]>c>d>0J j0JU B*phCJ\;CJ5\jS? CJUVaJmH sH  jU;CJ 5CJH*\H*J, L  ^ "" $[dh][a$$]a$Q>u>"Z"["z"{"|"}""7#$f%h%~%%% $\$If]\a$ $$If]a$ $[dh][a$%%%%%%%%%%&&Dnaa(naa,na $\$If]\a$$ & F$If]a$$$IfTlFb t 06    4 la &&&&&&&(&*&2&F&H&J&r(ar@ar(a$ & F$If]a$$$IfTlFb t 06    4 la $\$If]\a$ J&R&Z&\&^&f&n&p&r&z&&&r(ar(ar,$ & F$If]a$$$IfTlFb t 06    4 la $\$If]\a$ &&&&&&&&&&&&a(a@$$IfTlFb t 06    4 la $\$If]\a$$ & F$If]a$ &&&&&&&&&&&'(naa(naa(na $\$If]\a$$ & F$If]a$$$IfTlFb t 06    4 la '' ' '''' '('0'2'4'r(ar(ar(a$ & F$If]a$$$IfTlFb t 06    4 la $\$If]\a$ 4'<'D'F'H'P'\'^'`'h'|'~'r0ar@ar,$ & F$If]a$$$IfTlFb t 06    4 la $\$If]\a$ ~''''''''''''a0a($$IfTlFb t 06    4 la $\$If]\a$$ & F$If]a$ '''''''''(( (@naa@naa@na $\$If]\a$$ & F$If]a$$$IfTlFb t 06    4 la (( ("(*(>(@(B(J(^(`(b(r@ar@ar@a$ & F$If]a$$$IfTlFb t 06    4 la $\$If]\a$ b(j(~(((((*--rbbVNV$dha$ $[dh][a$$[ dh][` a$$$IfTlFb t 06    4 la $\$If]\a$---.P/F0Z1244T56789:/<L==F>G>H>I>J>K>L>$ & F Edh]Ea$$ & F dha$ $[dh][a$L>M>N>O>P>Q>Z>[>\>g>h>i>r>s>t>u>v>&`#$&`#$ $[dh][a$d>e>f>g>i>j>p>q>r>v>0J j0JU0JmHnHu ' 0&P 1h. A!"#$V%DdJ  C A? "2tD>䋀.<PD`!HD>䋀.< 0Ax.,H.xݗMHQ{OӒERS+k!Z+ZfDn@hT]i6 \mQ;wn0ztǜwgzysΝsܹ#PxORY!#I0 jJ!uŐH:yu@[2d䣆΢kEC~tJY6n(oG$ڭA4u!ecX7d(rw,*vy^_] GABCDEFHOIJKLMNPRSTUVWXYZ[\]^_`abcdefghijklRoot Entry  F@!>;+s@Data 4WordDocument )fObjectPool ;+s@!>;+s_1067747411F ;+sg;+sOle PRINT8 CompObj6d  !"#$%&'()*+,-./0123457:;<=>?@ABCDEFGHIJKLMNOPQRSTUVWXYZ[\]^_`abdefghijlmnoprt,!  $   ''  "Arial-----"Arial-------"System-'- -'- - "- $UUU "-UUU "-U-ss&&==UU~~++ "---'--- ---'--- J---'--- J- "- % (|>Si~% #@+_AWl% ;j/|(/---'--- J---'--- ---'--- ---'---   2 0 2 10 2 Z20 2 30 2 40 2 r50 2 $60 2 70 2 80 2 <90---'--- ---'---   2 210 2 2100 2 2T10002 210000---'--- ------'--- mb $2 yikoncentracija (ppb)  ----'--- -----'--- ~y2 "Arial- 2 =B/Bo-----'--- --'  '  ' FMicrosoft Graph 2000GBiff5MSGraph.Chart.89qObjInfo 8Workbook9s 1TableQ7SummaryInformation( c A@B"#,##0\ "kn";\-#,##0\ "kn"##,##0\ "kn";[Red]\-#,##0\ "kn"$#,##0.00\ "kn";\-#,##0.00\ "kn")$#,##0.00\ "kn";[Red]\-#,##0.00\ "kn">*9_-* #,##0\ "kn"_-;\-* #,##0\ "kn"_-;_-* "-"\ "kn"_-;_-@_->)9_-* #,##0\ _k_n_-;\-* #,##0\ _k_n_-;_-* "-"\ _k_n_-;_-@_-F,A_-* #,##0.00\ "kn"_-;\-* #,##0.00\ "kn"_-;_-* "-"??\ "kn"_-;_-@_-F+A_-* #,##0.00\ _k_n_-;\-* #,##0.00\ _k_n_-;_-* "-"??\ _k_n_-;_-@_-1Arial1Arial1Arial1Arial1Arial=,##0.00\ A@883ffff̙̙3f3fff3f3f33333f33333\R3&STU$@Y@@@@ B/Bo@U@Q@D@.@WY<#= >X4 U 3 d 3Q  B/BoQQQ3_43_4E4 3Q  WestQQQ3_43_4E4 3Q NorthQQQ3_4E4D $% M@3O&Q4$% M@3O&Q4FA`  3OB c 3 bo43*4%  -M3Oq&Q *koncentracija (ppb)'4% >MZ3O&Q  B/Bo'4523  43" =3 M NM4=3 M MN43_ M NM ] d4444  Oh+'0 0 @L h t  BKONTAMINACIJA DEOKSINIVALENOLOM (VOMITOKSINOM) KUKURUZA RODA 1999TONTCAK MINAK AK NormalNCAK lN51 Microsoft Word 9.0I@DF@` p@&A@+s ՜.+,0H hp  &Hrvatski veterinarski institut7  BKONTAMINACIJA DEOKSINIVALENOLOM (VOMITOKSINODocumentSummaryInformation8kxCompObjqkM) KUKURUZA RODA 1999 Naslov  FDokument Microsoft Worda MSWordDocWord.Document.89q i8@8 NormalCJ_HaJmHsHtH 6@6 Naslov 1$$@&a$5\D@D Naslov 2$$[dh@&][a$5\D@D Naslov 3$$[dh@&][a$5\6A@6 Zadani font odlomkaBB@B Tijelo teksta$a$ 5;CJ\FP@F Tijelo teksta 2$[dh][a$.U@. Hiperveza >*B*ph3:Q@": Tijelo teksta 3 T]TF^2F Standard (Web)dd[$\$mH sH 0 @B0 Podno~je  _$*)@Q* Broj stranice2@b2 Zaglavlje  _$fSTU  y|P  Z[z{|}7 +,-1567;@ABFJKLPZ[\`defjnoptxyz~  &'(,678<FGHLVWX\fghlvwK'(45ZQf(}~00000U0U0U0U0U0U0U0U0U0U0U0U0U0U0U0U0U0U0U0U0U(0U000000000U00000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0 000 0 000 0 000 0 000 0 000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 0000 00000000000 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0  0  0  0  0  0 000000000000@0@0@0 0 ####&d>v>!2"%&J&&&'4'~'' (b(-L>v>"$%&'()*+,-./01u>#[vx: &!!!Y^iqw~9FYiJM}htw nxR\iq #+2|-/58?GO\cpw   $ & -   : B ~ * 6 m | 3=p| ARM\5=T_w~_fgijoptu{|  &+,/078:;@DLPWXbdhinpv%&,-;=ABEGK &*27:y9D  *+./78BCEFIJMTZpsvy %&,-2379@ACDJKNOVW\aegjrv  .1;EINORSXcgRU~ xy{|O P   Y}67 *-0147:;?BEFILOPY\_`cfijmpstwz}~ %(+,58;<EHKLUX[\ehkluwJK&(35YZPQ ef'(|VV?@wx  [y{|CAK C:\My Documents\Radovi\don.docCAK C:\My Documents\Radovi\don.docCAK C:\My Documents\Radovi\don.docCAK C:\My Documents\Radovi\don.docCAK C:\My Documents\Radovi\don.docCAK C:\My Documents\Radovi\don.docCAK C:\My Documents\Radovi\don.docCAK C:\My Documents\Radovi\don.docCAK C:\My Documents\Radovi\don.docCAK C:\My Documents\Radovi\don.docFBGYd_h#nh^`.h^`.hpLp^p`L.h@ @ ^@ `.h^`.hL^`L.h^`.h^`.hPLP^P`L.h^`.h^`.hpLp^p`L.h@ @ ^@ `.h^`.hL^`L.h^`.h^`.hPLP^P`L.h ^`OJQJo(h^`.h pp^p`OJQJo(h @ @ ^@ `OJQJo(h ^`OJQJo(oh ^`OJQJo(h ^`OJQJo(h ^`OJQJo(oh PP^P`OJQJo(#nYd_hFB                             +,-1567;@ABFJKLPZ[\`defjnoptxyz~  &'(,678<FGHLVWX\fghlvw}@||@J|\ 77777777777PP PPPPD@P$P&P(P*P\@P0P4P6P8P:Px@UnknownG:Times New Roman5Symbol3& :Arial;Wingdings?5 :Courier New"qhQY8[[&3 7"r0d} 2QAKONTAMINACIJA DEOKSINIVALENOLOM (VOMITOKSINOM) KUKURUZA RODA 1999CAK CAK