Naslov
USPOREDBA METODA ZA IZOLACIJU RNA IZ UZORAKA EGZOSOMA BOLESNIKA S KOLOREKTALNIM KARCINOMOM
(COMPARISON OF METHODS FOR THE ISOLATION OF RNA FROM EXOSOME SAMPLES OF PATIENTS WITH COLORECTAL CARCINOMA)

Autori
Borović, Marko

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Farmaceutsko-biokemijski fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
19.04

Godina
2023

Stranica
44

Mentor
Andrea Hulina Tomašković

Ključne riječi
Kolorektalni karcinom, egzosomi, miRNA, Qiagen, ThermoFisher
(Colorectal carcinoma, exosomes, miRNA, Qiagen, ThermoFisher)

Sažetak
Kolorektalni karcinom (CRC) predstavlja ozbiljan dijagnostički i terapijski problem na globalnoj razini zbog stalno rastuće prevalencije. Multifaktorska je bolest, specifične etiologije za svakog bolesnika te je potrebna serija genskih mutacija tokom dužeg razdoblja za razvoj invazivnog karcinoma. Egzosomi koji potječu iz stanica kolorektalnog karcinoma sadrže molekule miRNA koje se povezuju s lošom prognozom tako što potiču proliferaciju, migraciju i invazivnost tumorskih stanica te predstavljaju potencijalan biomarker pokazujući značajnu korelaciju s patološkim stanjem i progresijom kolorektalnog karcinoma. Tekuća biopsija je neinvazivna metoda kojom se mogu izolirati cirkulirajući egzosomi i miRNA iz uzorka krvi što može voditi velikom napretku u ranoj dijagnostici karcinoma kao i u njegovom praćenju. Cilj diplomskog rada je usporediti metode Qiagen i ThermoFisher za izolaciju molekula RNA iz egzosoma kod bolesnika s kolorektalnim karcinomom. Početni je uzorak puna krv iz čije se plazme izolira egzosomalna RNA metodom precipitacije i organske ekstrakcije. Koncentracija dobivene RNA određuje se spektrofotmetrijski, dok se kvaliteta i integritet određuju metodom kapilarne elektroforeze. Ekspresija referentnih gena B2M i PPIA određena je metodom Taqman qPCR prema kojoj se određuje relativna ekspresija ciljnih gena. Također, uspoređuje se ekspresija ciljne miRNA (miR-19a-3p) za čiju se ekspresiju pretpostavlja da bi trebala biti povišena kod bolesnika s kolorektalnim karcinomom te referentne miRNA miR-103a-3p u odnosu na „spike-in“ miRNA UniSp6. Iz dobivenih se rezultata može zaključiti kako ne postoji statistički značajna razlika između metoda Qiagen i ThermoFisher, odnosno metode su jednakovrijedne i može se koristiti bilo koja od dvije metode za određivanje ekspresije miRNA bez značajne razlike u rezultatima. Unatoč niskoj koncentraciji izolirane RNA, uzorci su dovoljno kvalitetni za određivanje ekspresije miRNA. Sukladno tome, potvrđuje se prisutnost referentne (miR-103a-3p) i ciljne (miR-19a-3p) miRNA u svim uzorcima.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Farmacija

POVEZANOST RADA