Naslov
Optimizacija metode za određivanje transkripata RNA i miRNA u uzorcima egzosoma pacijenata sa kolorektalnim karcinomom
(OPTIMIZATION OF METHOD FOR DETERMINATION OF TRANSCRIPTS OF RNA AND miRNA IN EXOSOMES FROM COLORECTAL CANCER PATIENTS)

Autori
Barišić, Matej

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Farmaceutsko-biokemijski fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
21.09

Godina
2022

Stranica
42

Mentor
Andrea Hulina Tomašković

Ključne riječi
Kolorektalni karcinom, tekuća biopsija, egzosomi, RNA, miRNA, PCR, qPCR
(Colorectal cancer, liquid biopsy, exosomes, RNA, miRNA, PCR, qPCR)

Sažetak
Kolorektalni karcinom (CRC) multifaktorska je bolest složene etiologije i visoke prevalencije. U većini slučajeva nastaje iz na početku benignih adenoma koji postaju maligni nakon niza genskih mutacija u epitelnim stanicama kolona. Karakterizira ga spor razvoj i duga presimptomatska faza što predstavlja mogućnost za njegovo rano otkrivanje i liječenje. Tekuća biopsija neinvazivna je metoda za određivanje molekularnog profila tumora uključujući CRC, a egzosomalne RNA i miRNA obećavajući su biomarkeri za dijagnozu, prognozu i evaluaciju odgovora na terapiju u CRC-u. Cilj ovog rada bila je optimizacija metode za određivanje transkripata RNA i miRNA u egzosomima pacijenata sa CRC-om koji su u literaturi istaknuti kao potencijalni prognostički i terapijski biljezi ove bolesti. RNA je izolirana iz egzosoma iz plazme 18 bolesnika s potvrđenim CRC-om. Ekspresija C-MYC te referentnih gena B2M, PPIA i GAPDH, određena je pomoću qPCR tehnike i TaqMan eseja, a ekspresija miR-19a-3p, miR-92a-3p, miR-125- 3p, miR-193a-3p, miR-210-3p te referentnih mir- 103a-3p, mir 1228-3p i miR-520d-3p pomoću SYBR green tehnologije. Koncentracija RNA kretala se u rasponu od 2, 44-51, 20 ng/ µl sa medijanom od 11, 48 ng/µl. Gen C-MYC kao i ispitivani referentni geni nisu dokazani niti u jednom uzorku što može značiti da su te mRNA prevelike za pakiranje u egzosome. S druge strane, od predloženih referentnih miRNA dokazana je ekspresija jedino miR-103a-3p zbog čega je kao standard s kojim se uspoređivala ekspresija ciljnih miRNA korištena sintetička UniSp6. U najvećem broju uzoraka (svih 18) dokazane su miR-19a-3p i miR-92a-3p dok je u najmanjem broju uzoraka (3) dokazana miR125-3p. Iz dobivenih rezultata može se zaključiti da su uzorci unatoč niskim koncentracijama RNA dovoljno kvalitetni za određivanje većine miRNA od interesa u našem istraživanju ali ne i za mRNA.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Farmacija

POVEZANOST RADA