Pregled bibliografske jedinice broj: 1254265
Characterization of S-adenosylhomocysteine hydrolase with a novel deletion
Characterization of S-adenosylhomocysteine hydrolase with a novel deletion // 6. simpozij studenata doktorskih studija PMF-a : knjiga sažetaka = 6th Faculty of Science PhD student symposium : book of abstracts / Schneider, Petra (ur.).
Zagreb: Prirodoslovno-matematički fakultet Sveučilišta u Zagrebu, 2022. str. 230-230 (poster, domaća recenzija, sažetak, znanstveni)
CROSBI ID: 1254265 Za ispravke kontaktirajte CROSBI podršku putem web obrasca
Naslov
Characterization of S-adenosylhomocysteine hydrolase with a novel deletion
Autori
Šimunić, Ena ; Rokić, Filip ; Vugrek, Oliver ; Kožich, Viktor
Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Sažeci sa skupova, sažetak, znanstveni
Izvornik
6. simpozij studenata doktorskih studija PMF-a : knjiga sažetaka = 6th Faculty of Science PhD student symposium : book of abstracts
/ Schneider, Petra - Zagreb : Prirodoslovno-matematički fakultet Sveučilišta u Zagrebu, 2022, 230-230
ISBN
978-953-6076-93-2
Skup
6. Simpozij studenata doktorskih studija PMF-a = 6th Faculty of Science PhD Student Symposium
Mjesto i datum
Zagreb, Hrvatska, 23.04.2022. - 24.04.2022
Vrsta sudjelovanja
Poster
Vrsta recenzije
Domaća recenzija
Ključne riječi
deletion ; AHCY
Sažetak
S-adenozilhomocistein-hidrolaza (SAHH) katalizira reakciju hidrolize S-adenozilhomocisteina (SAH) na adenozin i homocistein. Budući da je SAH produkt svih reakcija transmetilacije ovisnih o adenozilmetioninu i njihov kompetitivni inhibitor, njegovo uklanjanje ključno je za održavanje normalnog metilacijskog potencijala stanice te za normalnu funkciju organizma. [1] Do sada je pronađeno nekoliko mutacija koje uzrokuju smanjenje aktivnosti SAHH (R49C, R49H, G71S, D86G, A89V, Y143C, Y328D i W112Ter). U nedavnom istraživanju, uz ove poznate mutacije, kod češkog pacijenta otkrivena je delecija 4pb u kodirajućoj regiji SAHH, koja dovodi do pomaka okvira čitanja i preuranjene terminacije translacije na poziciji aminokiseline 403 (c.1207-1211del, p.N403Ter ; neobjavljeni rezultati). Preliminarna istraživanja pokazuju oko 20% aktivnosti SAHH u eritrocitima te varijabilno povećanje omjera SAH/SAM (S- adenozilmetionina) kod braće, majke i majčinog oca. Općenito, nedostatna aktivnost SAHH dovodi do inhibicije reakcija transmetilacije ovisnih o adenozilmetioninu što uzrokuje teške metaboličke poremećaje te patološka stanja kod ljudi. Ova metabolička bolest prvi put je opisana u Hrvatskoj 2004. godine [2]. U ovom istraživanju SAHH s novootkrivenom mutacijom prekomjerno je eksprimirana u bakterijskom soju E.coli BL21, u trajanju od 4h na 30°C, te je potom izolirana i pročišćena afinitetnom kromatografijom Ni-NTA. Za potvrdu izolacije prekomjerno eksprimiranog proteina i dobivanje uvida u njegovu strukturu korištene su SDS i nativna poliakrilamidna gel elektroforeza. Enzimska aktivnost mutiranog proteina izmjerena je spektrometrijski, uz dodatak 3-(4, 5- dimetiltiazol-2-il)-2, 5-difeniltetrazolijevog bromida (MTT), na temelju promjene apsorbancije uslijed nastajanja formazana u reakciji. Iz dobivenih podataka, kinetički parametri izračunati su korištenjem jednadžbe Michaelis-Menten, pomoću linearizacije Lineweaver-Burk. Također, izmjerena je enzimska aktivnost novootkrivenog mutiranog proteina uz dodatak 5, 5'-ditio-bis-(2-nitrobenzojeve kiseline) (DTNB), reagensa koji reagira s tiolnim skupinama i ditiotreitola (DTT). Kod novootkirvenog mutiranog proteina, kao i kod divljeg tipa i nekih od do sada poznatih mutiranih varijanti primijećen je povrat aktivnosti enzima nakon dodatka DTT-a.
Izvorni jezik
Engleski
Znanstvena područja
Biologija
POVEZANOST RADA
Ustanove:
Institut "Ruđer Bošković", Zagreb
