Naslov
Imunohistokemijska karakterizacija protutijela za membranske proteine Na+/K+ATPazu, neurolin i prijenosnik organskih kationa 1 u cjelovitim uzorcima zebrice (Danio rerio)
(Immunohistochemical characterization of Na+/K+ATP- ase, neurolin and organic cation membrane transporter 1 in zebrafish (Danio rerio) whole- mount samples)

Autori
Lončarić, Nora

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
26.09

Godina
2022

Stranica
54

Mentor
Karaica, Dean ; Klobučar, Goran

Ključne riječi
kriopreparati ; (imuno)fluorescencijska analiza ; aktin ; natrij-kalij ATP-aza ; zebrica
(ryosections ; (immuno)fluorescence analysis ; actin ; sodium-potassium ATPase ; zebrafish)

Sažetak
U posljednjih nekoliko desetljeća uporaba zebrice (Danio rerio) u biomedicinskim i toksikološkim istraživanjima eksponencijalno raste. Brojne studije istražuju fiziološku/ekotoksikološku funkciju specifičnih proteina lokaliziranih u različitim tkivima zebrice. Za takva istraživanja najčešće se koristi metoda cjelokupnih preparata u kombinaciji s fluorescentnom mikroskopijom. Trenutno ne postoji jedinstveni pristup za provođenje imunohistokemijskih analiza na cjelovitim uzorcima embrija zebrica. U ovom radu upotrijebila sam embrije zebrice (120 sati nakon oplodnje) za određivanje ključnih uvjeta pri pripremi cjelovitih uzoraka embrija zebrice za imunohistokemijsku analizu pomoću antitijela za Na+/K+¬ATPazu, ZN-8 i Oct1 membranske proteine. Dva fiksativa (4% paraformaldehid i Dents fiksativ) i tri različite temperature inkubacije (37 °C/30 min, 70 °C/15 min, 95 °C/5 min) testirani su kako bi se optimizirala imunohistokemijska metoda na cjelovitim uzorcima embrija zebrice. Rezultati su pokazali da upotreba različitih fiksativa i/ili obrade uzoraka pri određenoj temperaturi određuje optimalno vezanje protutijela. Fiksacija uzoraka Dentovim fiksativom je bila važna za detekciju proteina Na+/K+ATPaze dok su fiksacija i inkubacija uzoraka pri određenoj temperaturi bili važni za detekciju proteina ZN-8. Suprotno od toga, dizajnirana protutijela za protein Oct1 zebrice nisu pokazala specifično vezanje u embrijima zebrica. Zaključno, ovaj rad predstavlja jednostavan i objedinjen pristup za imunohistokemijsku lokalizaciju različitih proteina u cjelovitim uzorcima zebrice.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija, Temeljne medicinske znanosti

POVEZANOST RADA