Naslov
Utjecaj različitih uvjeta pohrane uzorka pune krvi na količinu i kvalitetu izolirane genomske DNA
(Effect of different storage conditions on isolated genomic DNA quantity and quality)

Autori
Pavičić, Tomislav ; Bunjevac, Amalija ; Ćelap, Ivana ; Tadinac, Sanja ; Štefanović, Mario

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Sažeci sa skupova, sažetak, znanstveni

Izvornik
Biochemia Medica / Pašalić, Daria - Zagreb : Hrvatsko društvo za medicinsku biokemiju i laboratorijsku medicinu (HDMBLM), 2022, S149-S150

Skup
10. kongres Hrvatskog društva za medicinsku biokemiju i laboratorijsku medicinu = 10th Congress of the Croatian Society of Medical Biochemistry and Laboratory Medicine

Mjesto i datum
Zagreb, Hrvatska, 28.09.2022. - 01.10.2022

Vrsta sudjelovanja
Poster

Vrsta recenzije
Domaća recenzija

Ključne riječi
Kvaliteta DNA, genomska DNA, kvantiteta
(DNA quality, quantity, genomic DNA)

Sažetak
Uvod: Za izolaciju DNA preporuča se svježi uzorak pune krvi. Hipoteza istraživanja je da se prinos, čistoća i/ili integritet DNA mijenjaju u različitim uvjetima pohrane. Cilj je ispitati utjecaj različitih uvjeta pohrane (temperatura i duljina pohrane) krvi na količinu i kvalitetu DNA. Materijali i metode: U pilot istraživanje su uključena 2 ispitanika kojima je krv uzorkovana u 6 Vacuette® K 3 EDTA spremnika (Greiner Bio-One), a DNA izolira- na kako slijedi: (i) odmah, (ii) nakon 1, 3, 7 i 15 dana pohrane na sobnoj temperaturi (ST), (iii) nakon 1, 3, 7, 15, 30 i 60 dana na 2-8 °C, (iv) nakon 15, 30 i 60 dana na - 20 °C. DNA je izolirana na kolonicama uz High Pure PCR Template Preparation Kit reagens (Roche). Prinos i čistoća su određeni mjerenjem apsorbancije na 260, 280 i 230 nm na DS-11 FX+ spektrofotometru (DeNovix Inc). Brojčana vrijednost integriteta (DIN) i veličina vrpce određeni su elektroforetski Genomic DNA ScreenTape reagensom na 4200 TapeStation System (Agilent Technologies). Genotipizacija MTHFR C677T mutacije je određena analizom krivulje taljenja na LightCycler v1.5 (Roche) uz TibMolbiol® reagens. Kriteriji prihvatljivosti uključuju sve navedeno: (i) prinos 3, 00-6, 00 μg, (ii) čistoću A260/A230 = 1, 8-2, 4 i (iii) A260/A260 = 1, 7-2, 0, (iv) integritet DIN ≥ 7, 0 i (v) veličinu vrpce > 48500 bp, (vi) uspješnost PCR umnažanja. Rezultati: Prinos je bio prihvatljiv za sve uvjete, osim kod pohrane na – 20 °C (< 3, 00 μg). Čistoća na A260/A280 je zadovoljavajuća za sve, dok su na A260/A230 neprihvatljivi uzorci izolirani nakon 30 i 60 dana na –20 °C (> 2, 4). Integritet i veličina vrpce nisu postignuti za uzorke izolirane nakon 7 i 15 dana na ST te 30 i 60 dana na 2-8 °C (DIN < 7, 0 ; vrpca < 48500 bp). U svim izolatima dobiveni su očekivani genotipovi (TT i CC). Zaključak: Dulja pohrana na ST i 2-8 °C dovodi do fragmentiranosti, a zamrzavanje rezultira manjim prinosom i smanjenom čistoćom DNA. Odabir uvjeta pohrane ovisit će o vrsti i specifičnosti primijenjenih metoda.

Izvorni jezik
Hrvatski, engleski

Znanstvena područja
Kliničke medicinske znanosti, Farmacija

POVEZANOST RADA