Pregled bibliografske jedinice broj: 1111176
Konstrukcija vektora za ekspresiju proteina SHH u staničnoj liniji melanoma čovjeka CHL-1
Konstrukcija vektora za ekspresiju proteina SHH u staničnoj liniji melanoma čovjeka CHL-1, 2021., diplomski rad, diplomski, Prirodoslovno-matematički fakultet, Biološki odsjek, Zagreb
CROSBI ID: 1111176 Za ispravke kontaktirajte CROSBI podršku putem web obrasca
Naslov
Konstrukcija vektora za ekspresiju proteina SHH u
staničnoj liniji melanoma čovjeka CHL-1
(Construction of vectors for SHH protein expression
in CHL-1 human melanoma cell line)
Autori
Čonkaš, Josipa
Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski
Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet, Biološki odsjek
Mjesto
Zagreb
Datum
25.01
Godina
2021
Stranica
65
Mentor
Sabol, Maja ; Blažević, Sofia Ana
Ključne riječi
signalni put HH-GLI ; Sonic Hedgehog ; kloniranje ; melanom ; transfekcija ; PI3K/AKT ; MAPK
(HH-GLI signaling pathway ; Sonic Hedgehog ; cloning ; melanoma ; transfection ; PI3K/AKT ; MAPK)
Sažetak
U današnje vrijeme, melanom se smatra jednim od najsmrtonosnijih tipova tumora sa sve većom učestalosti u populaciji. Uslijed izuzetno složene patogeneze bolesti, koja je povezana sa promjenama u jednom ili više signalnih puteva, istraživanja se usmjeravaju prema razvoju kombiniranih inhibitora kao potencijalne terapije. U ovom istraživanju dizajniran je vektor za prolaznu i stabilnu ekspresiju proteina SHH u staničnoj liniji melanoma čovjeka CHL-1. Aktivni oblik proteina SHH djeluje kao ligand koji se veže za transmembranski receptor Patched i pokreće signalni put Hedgehog-Gli. Ključna uloga signalnog puta HH-GLI je regulacija embriogeneze, dok se poremećena funkcija istog povezuje s inicijacijom, progresijom, invazijom i preživljenjem tumora. Kloniranjem dizajniranog sintetskog genskog fragmenta gBlock SHH u ekspresijski vektor pcDNA3 uspješno je eksprimiran aktivni oblik proteina SHH-N. Westernskom metodom otiska dokazano je da prolazna transfekcija stanične linije melanoma CHL-1 vektorom pcDNA3.1 - SHH dovodi do povećanja ekspresije gena SHH i autokrine aktivacije signalnog puta HH-GLI ovisne o ligandu, što potvrđuje povećana proteinska ekspresija SHH-N, PTCH1, transkripcijskog faktora GLI1 i GLI3R te smanjenje razine ekspresije proteina GLI3FL, 48 sati nakon transfekcije. Isto tako, ekspresija proteina SHH stimulirala je aktivaciju signalnih puteva PI3K i MAPK, no nije pokazala učinak na regulaciju staničnog ciklusa. Važnost dokazane interakcije je izuzetno velika i predstavlja temelj razvoja modela za istraživanje terapija u liječenju melanoma.
Izvorni jezik
Hrvatski
Znanstvena područja
Biologija, Temeljne medicinske znanosti
POVEZANOST RADA
Projekti:
HRZZ-IP-2018-01-4889 - Regulacija GLI koda u tumorima ovisnim o BRAF/NRAS mutacijama (GLIcode) (Sabol, Maja, HRZZ - 2018-01) ( CroRIS)
Ustanove:
Institut "Ruđer Bošković", Zagreb,
Prirodoslovno-matematički fakultet, Zagreb
