Naslov
Utjecaj afinitetnog privjeska na svojstva adenilosukcinat-sintetaze iz bakterije Helicobacter pylori
(Effect of affinity tag on properties of adenylosuccinate synthetase from Helicobacter pylori)

Autori
Petek, Ana

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
29.09

Godina
2020

Stranica
52

Mentor
Leščić Ašler, Ivana

Neposredni voditelj
Bubić, Ante

Ključne riječi
adenilosukcinat-sintetaza ; afinitetna kromatografija ; enzimska kinetika ; Helicobacter pylori ; histidinski privjesak
(adenylosuccinate synthetase ; affinity chromatography ; Helicobacter pylori ; histidine tag ; kinetic parameters)

Sažetak
Bakterija Helicobacter pylori za sintezu purina koristi reciklirajući put, a ključni enzim u tom putu jest adenilosukcinat-sintetaza (AdSS). Histidinski afinitetni privjesak omogućuje jednostavnije pročišćavanje proteina uz veći prinos, no istovremeno može utjecati na prvobitnu funkciju enzima. Stoga je provedena usporedba nativnog AdSS-a i AdSS-a obilježenog histidinskim privjeskom, kao cilj ovog diplomskog rada. Obilježeni AdSS je pročišćen u dva koraka, afinitetnom kromatografijom i gel filtracijom. Izmjerena mu je specifična enzimska aktivnost, te su određeni kinetički parametri za sva tri supstrata reakcije. Provedena je inhibicija AdSS- a jednim od produkata reakcije – GDP-om. Određeno je temperaturno i pH područje stabilnosti ovog enzima. Udio elemenata sekundarne strukture u AdSS-u određen je metodom cirkularnog dikroizma. Enzim je kristaliziran tehnikom difuzije para iz viseće kapi, pri različitim koncentracijama proteina. Dobiveni rezultati pokazuju kako histidinski privjesak ne utječe znatno na funkciju AdSS, te se tako obilježeni enzim može pouzdano koristiti u budućim istraživanjima.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Kemija, Biologija, Interdisciplinarne prirodne znanosti

POVEZANOST RADA