Naslov
Usporedba različitih postupaka izolacije terapijskih imunoglobulina G iz hiperimune konjske plazme
(Comparison of different procedures for therapeutic immunoglobulin G purification from hyperimmune horse plasma)

Autori
Mateljak Lukačević, Sanja ; Kurtović, Tihana ; Brgles, Marija ; Steinberger, Stephanie ; Marchetti-Deschmann, Martina ; Halassy, Beata

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Sažeci sa skupova, sažetak, znanstveni

Izvornik
Simpozij studenata doktorskih studija PMF-a, Knjiga sažetaka / Rončević, Sanda ; Barišić, Dajana - Zagreb : Prirodoslovno-matematički fakultet Sveučilišta u Zagrebu, 2020, 95-95

ISBN
978-953-6076-57-4

Skup
4. Simpozij studenata doktorskih studija PMF-a = 4th Faculty of Science PhD Student Symposium

Mjesto i datum
Zagreb, Hrvatska, 28.02.2020

Vrsta sudjelovanja
Poster

Vrsta recenzije
Domaća recenzija

Ključne riječi
antivenom, IgG, pročišćavanje, stabilnost, agregati, potklase
(antivenom, IgG, purification, stability, aggregate, subclass)

Sažetak
Antivenomi su jedini učinkoviti lijekovi za tretiranje posljedica ugriza zmija otrovnica čija su djelatna tvar cjeloviti imunoglobulini G (IgG) ili njihovi fragmenti (Fab ili F(ab')2). Dobivaju se različitim postupcima pročišćavanja iz hiperimune životinjske plazme s ciljem odstranjenja preostalih komponenata plazme i smanjenja intenziteta neželjenih popratnih pojava nakon primjene ovih biofarmaceutika. Međutim, iako „pročišćeni“, IgG-i još uvijek povremeno izazivaju nuspojave koje se pripisuju zaostalim kontaminirajućim proteinima i/ili agregatima. Prema podacima u literaturi, pretpostavlja se da postupci pročišćavanja tijekom kojih su IgG molekule izložene nepovoljnim uvjetima, narušavaju njihov strukturni integritet čime im se smanjuje stabilnost i povećava sklonost agregaciji. Nasuprot tome, primjenom postupaka pročišćavanja u kojima se imunoglobulini održavaju cijelo vrijeme u otopini takvi nepovoljni učinci smanjuju se ili potpuno izostaju. Cilj ovog istraživanja bio je ispitati navedenu hipotezu usporedbom i karakterizacijom IgG pripravaka dobivenih primjenom sljedećih 5 postupaka pročišćavanja: taloženjem kaprilnom kiselinom (CA), taloženjem amonijevim sulfatom (AS), kromatografijom kationske izmjene (CEX), kromatografijom anionske izmjene (AEX) te afinitetnom kromatografijom (AFI). Dobivene IgG frakcije analizirane su obzirom na čistoću, stabilnost i promjene u sastavu IgG potklasa. Preparati najveće čistoće dobiveni su postupcima taloženja kaprilnom kiselinom i afinitetnom kromatografijom, dok su najviše agregata sadržavali preparati pročišćeni afinitetnom kromatografijom, kromatografijom kationske izmjene i taloženjem amonijevim sulfatom. Kontaminirajući proteini identificirani su spektrometrijom masa. Afinitetna kromatografija uzrokovala je najveće promjene u sastavu IgG potklasa s najvećim gubitkom IgG(T) potklase. Analizom stabilnosti preparata dobivene su podjednake vrijednosti temperatura taljenja (Tm) svih uzoraka osim nešto smanjene vrijednosti IgG-a pročišćenih afinitenom kromatografijom. Tm vrijednosti i udio agregata ostali su nepromijenjeni nakon mjesec dana pohrane na 37 °C. Dosadašnji rezultati pokazuju da se različitim postupcima pročišćavanja dobivaju IgG-i različite čistoće i sastava potklasa što bi moglo utjecati kako na sigurnost tako i na djelotvornost antivenoma. Međutim, povećanje agregacije ne mora nužno biti posljedica promjena u strukturi IgG-a nastalih tijekom pročišćavanja.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija, Biotehnologija u biomedicini (prirodno područje, biomedicina i zdravstvo, biotehničko područje)

POVEZANOST RADA