Naslov
Kloniranje i karakterizacija SNX9 u HEK292 i DAMI staničnoj liniji
(Characterization and cloning of SNX9 fused with green fluorescent protein in DAMI and HEK293 cell line)

Autori
Tomović, Eni

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Odjel za biotehnologiju

Mjesto
Rijeka

Datum
19.09

Godina
2019

Stranica
62

Mentor
Jurak Begonja, Antonija

Ključne riječi
DAMI stanice, SNX9, polimerizacija aktina, PI(4, 5)P2
(DAMI cell line, SNX9, actin polymerisation, PI(4, 5)P2)

Sažetak
Trombociti, najmanje krvne stanice koje imaju važnu ulogu u hemostazi, nastaju u koštanoj srži iz prekursora, megakarocita. U procesu nastanka trombocita reorganizacija aktinskog citoskeleta je esencijalna. Sortirajući neksin 9 (engl. Sorting nexin 9, SNX9) je višefunkcijski protein koji koordinira promet na membrani i dinamiku aktina unutar stanica. SNX9 aktivira proteine Wiskott-Aldrich sindroma (engl. Wiskott–Aldrich Syndrome protein, WASP) koji zauzvrat iniciraju polimerizaciju aktina putem Arp2/3 kompleksa. Arp2/3 kompleks se veže za aktinske filamente kako bi se započelo grananje F-aktinskih niti. Kako bi polimerizacija aktina bila potpuno uspješna potrebne su male Rho GTPaze te PI(3)P i PI(4, 5)P2, važni signalni lipidi. Ovim radom ispitana je ekspresija i unutarstanična lokalizacija SNX9 u ljudskoj megakarioblastičnoj staničnoj liniji (DAMI). Naši glavni rezultati pokazali su kako je ekspresija SNX9 povećana u diferenciranim DAMI stanicama te kako SNX9 lokalizira ili perinuklearno ili je jednoliko raspršen po citoplazmi stanice. U diferenciranim DAMI stanicama SNX9 je često bio prisutan u obliku diskretnih vezikula koje su dijelom kolokalizirale s F-aktinom. Nadalje, kako bi dodatno ispitali lokalizaciju i učinak egzogene ekspresije SNX9, subklonirali smo SNX9 fuzioniran sa zelenim fluorescentnim proteinom (engl. green fluorescent protein, GFP) u retroviralni vektor (engl. Murine stem cell virus vector, MSCV). Točna veličina GFP-SNX9 i njegova lokalizacija je potvrđena u HEK293T staničnoj liniji. Ekspresija GFP-SNX9 u DAMI stanicama je pokazala podjednaku lokalizaciju kao endogeni SNX9. GFP-SNX9 je povećao polimerizaciju aktina (F-aktin) u nestimuliranim DAMI i HEK293T, ali ne i u diferenciranim DAMI stanicama. Dodatno, ekspresija GFP-SNX9 povisila je razinu PI(4, 5)P2 u DAMI stanicama. Ovi rezultati ukazuju na to da bi SNX9 mogao biti uključen u proces polimerizacije aktina u DAMI stanicama te bi daljnja istraživanja mogla pomoći u definiranju uloge SNX9 u formiranju trombocita.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija, Biotehnologija u biomedicini (prirodno područje, biomedicina i zdravstvo, biotehničko područje)

POVEZANOST RADA