Naslov
Vektorski sustav za stabilnu genomsku ugradnju ekspresijske kazete transpozazama
(A vector system for transposase-mediated stable genomic integration of an expression cassete)

Autori
Mijakovac, Anika

Vrsta, podvrsta i kategorija rada
Ocjenski radovi, diplomski rad, diplomski

Fakultet
Prirodoslovno-matematički fakultet

Mjesto
Zagreb

Datum
13.03

Godina
2019

Stranica
46

Mentor
Vojta, Aleksandar

Ključne riječi
transpozon ; vektor ; sleeping beauty ; piggyBac ; izolator
(transposon ; vector ; sleeping beauty ; piggyBac ; insulator)

Sažetak
DNA transpozoni su pokretni genetiĉki elementi koji sadrže gen koji kodira enzim transpozazu omeĊen terminalnim sljedovima IR (eng. inverted repeats). Transpozaza veže terminalne sljedove IR i katalizira transpoziciju omeĊenog gena, što omogućuje pokretanje DNA transpozona. Na temelju mehanizma transpozicije DNA transpozona izvedeni su sintetiĉki vektorski sustavi za prijenos gena kod kojih je slijed od interesa na plazmidu omeĊen terminalnim sljedovima IR dok je transpozaza eksprimirana in trans. Ovakvi sustavi omogućuju ugradnju ekspresijske kazete u genom animalnih stanica te nude alternativu dosadašnjim viralnim i neviralnim metodama prijenosa gena. Kako bi se omogućila dugotrajna ekspresija transgena u vektore se dodaju izolatori, regulatorni sljedovi DNA koji stvaranjem kromatinskih barijera štite transgene od utišavanja. Cilj ovog istraživanja je bio izrada vektorskog sustava zasnovanog na tehnologiji transpozona koji će omogućiti stabilnu ugradnju i dugotrajnu ekspresiju transgena u genomu domaćina. Uspješno su izraĊena dva plazmidna vektorska sustava zasnovana na DNA transpozonima sleeping beauty (SB) odnosno piggyBac (PB). Metodama restrikcije i ligacije su u svaki plazmid ugraĊena dva terminalna slijeda IR SB odnosno dva terminalna slijeda IR PB te po ĉetiri izolatorska slijeda. Istim metodama je izraĊen ekspresijski vektor za ekspresiju transpozaze PB in trans. Ispravnost svih plazmidnih konstrukata je potvrĊena metodom restrikcijske analize ili metodom analize kolonija putem PCR reakcije te sekvenciranjem.

Izvorni jezik
Hrvatski

Znanstvena područja
Biologija

POVEZANOST RADA