hrvatski

Identifikacija kinaze odgovorne za fosforilaciju mitohondrijskog proteina NIX

Dosadašnja istraživanja ukazuju kako fosforilacija uvelike pospješuje vezanje mitohondrijskog proteina NIX za autofagosomalne receptore mitofagije LC3A i LC3B prilikom regrutiranja autofagosoma. Cilj ovog istraživanja je identificirati kinazu odgovornu za fosforilaciju proteina NIX što bi moglo dodatno razjasniti mehanizam regulacije mitofagije. In silico analizom odabrane su kinaze IKKβ i GSK3β koje su testirane metodom Pull-down i imunoprecipitacijom na interakciju s fuzijskim proteinom EGFP-NIX i njegovim mutantama. Western blot imunodetekcijom provjerena je proteinska interakcija mitohondrijskog proteina NIX i dviju odabranih potencijalnih kinaza. Rezultati pokazuju interakciju proteina NIX s kinazom GSK3β, dok interakcija s kinazom IKKβ izostaje te se iz rezultata zaključuje kako je mitohondrijski protein NIX u interakciji s kinazom GSK3β. S obzirom na ustanovljenu interakciju s kinazom GSK3β, ciljnom mutagenezom in vitro napravljene su dvije mutante, jedna s konstitutivno aktivnom kinazom GSK3β te druga čija je kinazna domena inaktivna. Buduća istraživanja s navedenim konstruktima trebala bi pokazati fiziološku važnost ove interakcije.

autofagija, mitofagija, NIX, fosforilacija, kinaza, GSK3b, IKKb

nije evidentirano