hrvatski

Određivanje broja tripleta CTG u molekularnoj dijagnostici miotonične distrofije tipa 1 kapilarnom elektroforezom

UVOD: Miotonična distrofija tipa 1 (MD1) je autosomno dominantno nasljedni multiorganski poremećaj koji može zahvatiti skeletne i glatke mišiće, očne leće, srce, endokrini, gastrointestinalni i centralni živčani sustav. Uzrok MD1 je povećanje broja tripleta CTG (dinamička mutacija) u genu za miotonin protein kinazu (DMPK) na 19. kromosomu. Postoje 3 moguća fenotipa bolesti: blagi, klasični i kongenitalni. U zdravih osoba broj ponavljanja tripleta CTG iznosi 5 - 34 i ostaje stabilan tijekom generacija. Kod oboljelih osoba ovaj je slijed produljen i sadrži više od 50 tripleta (čak i do nekoliko tisuća), a težina kliničke slike, kao i vrijeme javljanja bolesti povezani su s veličinom mutiranog alela u sklopu modela složenih korelacija genotipa i fenotipa. Osobe s 35 - 49 tripleta zdravi su prenositelji bolesti, odnosno nositelji tzv. premutacijskog alela. CILJ: Cilj rada bio je odrediti broj CTG tripleta u skupini od 405 pacijenata upućenih na DNA analizu zbog kliničkih simptoma MD1 ili postojanja iste u obiteljskoj anamnezi. METODE: Korištena je metoda PCR za utvrđivanje alela u normalnom rasponu nakon koje je slijedila analiza kapilarnom elektroforezom na uređaju Applied Biosystems 3130xl Genetic analyzer. U slučajevima kada je u ispitivanom uzorku DNA bio utvrđen samo jedan alel DMPK slijedila je analiza metodom TP-PCR (engl. triplet repeat primed). Ovom metodom moguće je utvrditi postojanje ekspandiranog alela ili isključiti njegovo prisustvo, no veličina samog alela određuje se metodom hibridizacije. REZULTATI: Od 405 analiziranih DNA uzoraka utvrđeno je 55 uzoraka sa ekspandiranim alelom (13, 6%) dok su 263 (64, 9%) uzorka bili heterozigoti za alele u normalnom rasponu. ZAKLJUČAK: Određivanje broja tripleta CTG u genu DMPK pomaže razumijevanju genetičkog mehanizma bolesti i postavljanju molekularne dijagnoze MD1. TP-PCR i fragmentarna analiza pomoću kapilarne elektroforeze su metode izbora za dijagnostiku MD1 zbog njihove točnosti i dijagnostičke osjetljivosti.

miotonična distrofija tipa 1 ; gen DMPK ; TP-PCR

nije evidentirano