hrvatski

Izolacija amilaze amilolitičke bakterije mliječne kiseline Lactobacillus amylovorus DSM 20531T ion-izmjenjivačkom kromatografijom

Amilolitička bakterija mliječne kiseline Lactobacillus amylovorus DSM 20531T uzgojena je u MRS podlozi s maltozom kao supstratom u laboratorijskom bioreaktoru s miješalom pri konstantnoj temperaturi, pH vrijednosti suspenzije i broju okretaja miješala. Iz eksperimentalnih podataka procijenjeni biokinetički parametri za rast biomase i proizvodnju mliječne kiseline s pomoću ovog bakterijskog soja jasno pokazuju da je L. amylovorus DSM 20531T izvrstan kandidat za industrijsku proizvodnju ove kiseline. Maltoza inducira proizvodnju vanstanične amilaze u relativno visokim koncentracijama i zadovoljavajuće aktivnosti za provođenje izolacije i pročišćavanja ovog enzima. Proizvedena amilaza je izdvojena taloženjem amonijevim sulfatom i to pri 25, 50 i 75% zasićenja. Većina aktivne amilaze izdvojena je pri 75% zasićenja otopine amonijevim sulfatom, pa su ovako dobiveni peleti korišteni za daljnje pročišćavanje izdvojenog enzima. Pročišćavanje resuspendirane amilaze provedeno je ion-izmjenjivačkom kromatografijom. Od ukupno pet proteinskih pikova odijeljenih tijekom eluiranja proteina s ion-izmjenjivačke kolone pomoću otopine natrijeva klorida, samo tri proteina imaju amilolitičku aktivnost. Najmanju specifičnu aktivnost ima protein eluiran pri 0, 5 mol L-1 NaCl (47 U mg- 1), dok veću specifičnu aktivnost imaju proteini eluirani pri 0, 4 (62 U mg-1) i 0, 6 mol L-1 natrijevog klorida u puferu (263 U mg-1). Sve tri ion-izmjenjivačkom kromatografijom izdvojene frakcije amilaze sadrže nekoliko proteinskih vrpci, kako je to utvrđeno SDS-PAGE metodom, i to molekulskih masa između 50 i 94 kDa.

amilolitička bakterija mliječne kiseline, Lactobacillus amylovorus, indukcija amilaze, taloženje proteina, ion-izmjenjivačka kromatografija

nije evidentirano