hrvatski

Lokalizacija proteina NME6 i testiranje antitijela anti-NME6

Nukleozid-difosfatske kinaze (NDPK/Nm23/NME) čine obitelj evolucijski očuvanih enzima, koji prenose γ fosfatnu skupinu s andenozin trifosfata na nukleozid difosfate i na taj način održavaju ravnotežu nukleotida u stanci, a smatra se da imaju i neke druge biokemijske funkcije. Nuklozid-difosfatske kinaze sudjeluju u brojnim biološkim procesima kao što su proliferacija, diferencijacija i razvoj, a imaju značajnu ulogu i u razvoju tumora i metastaziranju. Unatoč brojnim istraživanjima, njihova biološka funkcija nije do danas u potpunosti razjašnjena. Deset članova obitelji proteina NME (od NME1 do NME10) podijeljeni su u dvije skupine. Skupinu I čine proteini od NME1 do NME4 i svi posjeduju aktivnost kinaze NDP, dok u skupinu II ubrajamo NME5 do NME10, od kojih većina ne pokazuje aktivnost kinaze NDP. Strukturno, NME6 dijeli svega 34-41% homologije s proteinima iz prve skupine, dok je njegov izražaj relativno nizak u većini tkiva. Malobrojna istraživanja upućuju na to da je NME6 smješten u mitohondrijima i u citoplazmi. Svrha diplomskog rada bila je odrediti unutarstanični smještaj proteina NME6 u humanim tumorskim stanicama HeLa uz pomoć fluorescentnog reporterskog sustava te testirati anti-NME6 antitijelo i optimizirati metodu Western blot. U tu svrhu koristili smo metode transformacije, transfekcije, fluorescentnu imunocitokemiju, analize Western blot te konfokalnu mikroskopiju.

Nm23 ; NME ; NDPK ; supresor metastaziranja ; stanična kultura ; antitijelo

nije evidentirano