hrvatski

Purinska nukleozidna fosforilaza iz soja 26695 bakterije Helicobacter pylori: Ekspresija, pročišćavanje i karakterizacija

Cilj ovog rada je pročišćavanje, karakterizacija i kristalizacija enzima purinske nukleozidne fosforilaze (PNPaza) iz bakterije Helicobacter pylori. PNPaza katalizira reverzibilno fosforolitičko cijepanje glikozidne veze ribo- i deoksiribonukleozida, u prisutnosti fosfata kao sekundarnog supstrata u svrhu nastajanja purinske baze i riboze(deoksiriboze)-1-fosfata. Neophodan je enzim kod sinteze purina iz metaboličkog otpada, jedinog aktivnog puta za sintezu purina u bakteriji H. pylori. Optimizirana je ekspresija PNPaze u bakteriji Escherichia coli. Prekomjerno eksprimirana PNPaza je pročišćena anionskom izmjenjivačkom kromatografijom i afinitetnom kromatografijom na koloni s vezanim inhibitorom. Aktivnost pročišćenog enzima ispitana je spektrofotometrijski uz različite primarne supstrate. Određeni su kinetički parametri i ispitana je ovisnost aktivnosti PNPaze o pH i temperaturi reakcijske smjese. Postavljeni su eksperimenti kristalizacije s pročišćenim enzimom metodom difuzije para u visećoj kapi u različitim uvjetima.

afinitetna kromatografija s vezanim inhibitorom, anionska izmjenjivaĉka kromatografija, Helicobacter pylori, kinetiĉki parametri, kristalizacijske probe, purinska nukleozidna fosforilaza

nije evidentirano