hrvatski

Utjecaj broja leukocita na koncentraciju i čistoću izolirane DNA

Izolacija DNA je ključni korak koji prethodi brojnim analizama u molekularnoj dijagnostici. Izlacija DNA iz leukocita isoljavanjem (po Milleru ili Qiagen test paketom) temelji se na odvajanju staničnih proteina povećanjem koncentracije soli i centrifugiranjem, nakon čega se DNA taloži apsolutnim etanolom. Cilj istraživanja je ispitati utjecaj broja leukocita na koncentraciju i čistoću izolirane DNA. Broj leukocita određen je neposredno nakon uzorkovanja na hematološkom brojaču. Uzorci pune krvi pomiješani s antikoagulansom EDTA su pohranjeni na -20° C do izolacije DNA. DNA je izolirana metodom po Milleru (N=227 ; 92 zdrava ispitanika i 135 ispitanika s kroničnom opstrukcijskom plućnom bolesti) i primjenom komercijalnog kita tvrtke Qiagen (N=173 ; 98 zdravih ispitanika i 75 ispitanika na hemodijalizi). Apsorbancije na 280 i 260 nm izmjerene su na DeNovix DS-11 spektrofotometru visoke osjetljivosti. Statistička analiza provedena je korištenjem MedCalc statističkog programa. Millerovom metodom izolacije u odnosu na Qiagen test paket dobivene su veće koncentracije DNA [138, 6 (123, 1-151, 7) vs 57, 0 (48, 0-76, 5) ng/µL ; P<0, 001] i čistoće [1, 7 (1, 7-1, 7) vs 1, 3 (1, 3-1, 5) ; P<0, 001]. Broj leukocita se značajno razlikovao u uzorcima korištenim za dvije različite metode izolacije. Pronađena je slaba korelacija između broja leukocita i koncentracije DNA (rs=0, 27 ; P<0, 001 i rs=0, 43 ; P<0, 001) i između broja leukocita i čistoće DNA (rs=0, 38 ; P<0, 001 i rs=0, 27 ; P<0, 001). Ovisno o korištenoj metodi broj leukocita je utjecao na koncentraciju i čistoću izolirane DNA, međutim uočena korelacija iako značajna je vrlo slaba. Svakako treba uzeti u obzir da su uzorci prije izolacije zamrznuti, što je moglo utjecati na dobivene rezultate.

izolacija DNA, metoda po Milleru, DNA, broj leukocita, Qiagen FlexiGene DNA kit, čistoća DNA, koncentracija DNA

nije evidentirano