hrvatski

Određivanje aktivnosti upalnih i apoptoznih kaspaza u THP-1 stanicama i monocitima

Izvanstanični protein Hsp70 djeluje kao molekularni obrazac oštećenja (DAMP, engl. damage-associated molecular pattern) preko receptora sličnog Tollu TLR2 i TLR4 te može uzrokovati upalni odgovor. Povišen je u krvi bolesnika s kroničnom opstrukcijskom plućnom bolesti. Patogeneza te bolesti uključuje kroničnu upalu i oštećenje tkiva, no nije potpuno razjašnjena. Cilj rada bio je ispitati djelovanje različitih koncentracija izvanstaničnog proteina Hsp70 te lipopolisaharida (LPS) i lipoteikoične kiseline (LTA) preko receptora TLR2 i TLR4 na diferencirane monocite iz periferne krvi zdravih donora i na THP-1 stanice, te utvrditi uzrokuju li aktivaciju inflamasoma i programirane stanične smrti (apoptoze). Prisutnost upale i aktivacije inflamasoma ispitani su mjerenjem aktivnosti kaspaze-1 u stanicama, a prisutnost apoptoze mjerenjem aktivnosti kaspaza-3/7, -8 i -9. Istraživanje smo proveli na THP-1 stanicama koje smo prethodno diferencirali u makrofage pomoću forbol 12-miristat-13-acetata (PMA) te na monocitima iz periferne krvi zdravih donora koje smo diferencirali pomoću čimbenika koji stimulira rast makrofagnih kolonija (M-CSF). Stanice su tretirane rekombinantnim humanim (rh) Hsp70 proteinom u koncentracijama od 0, 3, 1, 3 i 10 μg/mL, s 0, 1 μg/mL LPS-a te 1 μg/mL LTA tijekom 2, 4, 6 i 8 sati. Aktivnosti kaspaza u stanicama izmjerene su luminometrijskim testom. Rezultati su pokazali da tretiranje LPS-om i LTA u THP-1 stanicama dovodi do aktivacije kaspaze-1. LPS potiče i aktivaciju kaspaza-3/7 te kaspaze-8 u THP-1 stanicama. Kod monocita, LPS i LTA potiskuju aktivnost kaspaze-1, a LTA uzrokuje i smanjenje aktivnosti kaspaze-9. rhHsp70 primijenjen u nižim koncentracijama i nakon kraćeg vremena inkubacije potiskuje aktivnost kaspaze-1 u THP-1 stanicama, a pri višim koncentracijama i nakon duljeg vremena inkubacije stimulira njenu aktivnost. Nakon 8 sati inkubacije rhHsp70 uzrokuje i smanjenje aktivnosti kaspaza-3/7 u ovim stanicama. Kod monocita, tretiranje s rhHsp70 potiče aktivnost kaspaze-1, dok visoke koncentracije rhHsp70 snižavaju aktivnost kaspaze-9. Zaključno, LPS i LTA uzrokuju aktivaciju inflamasoma, a LPS aktivira i apoptozne kaspaze-3/7 i -8 u THP-1 stanicama, dok u monocitima LPS i LTA ne dovode do aktivacije inflamasoma i apoptoze. rhHsp70 djeluje protu-upalno u nižim koncentracijama, a u višim koncentracijama uzrokuje aktivaciju inflamasoma u THP-1 stanicama, dok na monocite djeluje upalno i protu-apoptozno.

izvanstanični Hsp70, LPS, LTA, kaspaze, THP-1 stanice, monociti

nije evidentirano