hrvatski

Određivanje koncentracije proteina- usporedba Bradford, Lowry i Biuret metode

Određivanje koncentracije proteina u uzorku bitan je korak svake analize. Danas su poznate razne metode kvantifikacije proteina, ali klasične spektrofotometrijske metode, kao što su Biuret, Lowry i Bradford metoda, najčešće su korištene metode u biokemijskim i medicinskim istraživanjima. Sve metode imaju prednosti i nedostatke, a temelje se na reakciji metalnih iona i boja s proteinima, pri čemu nastaje produkt karakteristične boje čija se apsorbancija prati na određenoj valnoj duljini.. Mjerenje apsorbancije za Biuret metodu je na valnoj duljini od 540 nm, te na 595 nm za Lowry i Bradford metodu. Cilj ovoga rada je ispitati i usporediti osjetljivost Biuret, Lowry i Bradford metode za određivanje koncentracija proteina izoliranih iz humanih stanica karcinoma vrata maternice, poznatih pod nazivom HeLa stanice. Koncentracija proteina određena je i modificiranom Bradford metodom, gdje se za pripremu Bradford reagensa, umjesto CBB G-250 koristila CBB R-250. Najviše koncentracije proteina određene su modificiranom Bradford metodom, dok su korištenjem komercijalnog Bradford reagensa izmjerene najniže koncentracije. Također, opisan je i metodički dio na temu „Aminokiseline i proteini“ za 4. razred srednje škole koji sadrži pisanu pripremu za nastavni sat, radni listić, te dva pokusa. Ova nastavna tema obrađuje se kombinacijom frontalnog rada i grupni rada (izvođenje predviđenih pokusa u 4 skupine).

Biuret metoda/Bradford metoda/HeLa stanice/Lowry metoda/proteini

nije evidentirano