hrvatski

Utvrđivanje autentičnosti staničnih linija analizom kratkih ponavljajućih sljedova – STR profi

Uvod: Kontinuirane stanične linije dobro su utvrđeni modeli za proučavanje raznih zdravstvenih stanja, osobito malignih oboljenja, iako, pri radu s njima, treba biti oprezan i svjestan mogućih problema kontaminacije koja ima dalekosežne posljedice na rezultate znanstvenih istraživanja. Upravo iz tog razloga osmišljeni su brojni testovi pomoću kojih je moguće odrediti identitet stanične linije, odnosno odrediti je li stanična linija „slobodna“ od druge stanične linije i/ili mikroorganizma. Takvi testovi se nazivaju testovima autentifikacije, a najčešće korišteni test, koji je ujedno i trenutni „zlatni standard“, jest analiza kratkih ponavljajućih sljedova, odnosno STR profiliranje. Cilj: Cilj ovog istraživanja jest utvrđivanje autentičnosti 6 staničnih linija uzgojenih in vitro metodom analize kratkih ponavljajućih sljedova- STR profiliranjem, kao i određivanje postotka podudarnosti elektroferograma s ATCC-ovom bazom podataka. Materijal i metode: U istraživanju je korišteno 6 staničnih linija (HeLa, SW620, CCRF-CEM, K-562, HT-29, Caco-2) kojima je analizirano 15 lokusa + amelogenin. Koraci analize su: izolacija DNK, određivanje koncentracije DNK, PCR umnažanje i elektroforeza. Za analizu rezultata primjenjen je program GeneMapper software za izradu elektroferograma. Rezultati: Dobiveni su elektroferogrami koji su uspoređivani s referentnom bazom STR profila te je na osnovu toga određena autentičnost i postotak podudarnosti između staničnih linija. Autentičnima su se pokazale stanične linije HeLa, SW620, CCRF-CEM, HT-29 sa 100% podudarnošću, Caco-2 sa 75%, dok se kod K-562 stanične linije nije odredio STR profil. Zaključak: određivanjem STR profila utvrđena je autentičnost HeLa, SW620, HT-29, CCRF-CEM staničnih linija, dok je za Caco-2 potrebno učiniti dodatne analize kako bi se donio konačni zaključak o autentičnosti. Za K562 potrebno je ponoviti cjelokupan analitički proces utvrđivanja STR profila.

stanična linija, kontaminacija, autentičnost, STR profil

nije evidentirano